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Microscopie confocale à vie de la cornée
Dernière revue: 06.07.2025
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La microscopie confocale de la cornée est l'une des méthodes de recherche modernes; elle permet une surveillance intravitale de la cornée avec visualisation des tissus au niveau cellulaire et microstructural.
Cette méthode, grâce à la conception originale du microscope et à son pouvoir de résolution élevé, permet la visualisation du tissu cornéen vivant, la mesure de l'épaisseur de chacune de ses couches et l'évaluation du degré de troubles morphologiques.
Le but de la microscopie confocale cornéenne
Caractériser les changements morphologiques de la cornée qui surviennent dans diverses maladies inflammatoires et dystrophiques, ainsi qu'à la suite d'interventions chirurgicales et d'une exposition au CL.
Les données de l’examen morphologique sont nécessaires pour évaluer la gravité du processus pathologique, l’efficacité du traitement et pour déterminer les tactiques de prise en charge du patient.
Indications pour la procédure
- Maladies inflammatoires de la cornée ( kératite ).
- Maladies dystrophiques de la cornée ( kératocône, dystrophie de Fuchs, etc.).
- Syndrome de l'œil sec.
- Affections après interventions chirurgicales sur la cornée ( greffe de cornée pénétrante, chirurgies kératoréfractives).
- Affections associées au port de lentilles de contact.
Technique microscopie confocale de la cornée
L'étude est réalisée à l'aide d'un microscope confocal ConfoScan 4 (Nider) avec un grossissement de 500 fois. Cet appareil permet d'examiner la cornée sur toute son épaisseur.
La zone examinée mesure 440 × 330 μm et l'épaisseur de la couche de balayage est de 5 μm. La lentille munie d'une goutte de gel est appliquée sur la cornée jusqu'à ce qu'elle la touche et est installée de manière à ce que l'épaisseur de la couche de liquide d'immersion soit de 2 mm. La conception de l'appareil permet d'examiner la cornée dans sa zone centrale et ses zones paracentrales.
Performance normale
Image morphologique normale de la cornée
L'épithélium antérieur est constitué de 5 à 6 couches de cellules. Son épaisseur moyenne est d'environ 50 µm. Selon la structure morphologique, on distingue les couches suivantes (de l'intérieur vers l'extérieur): les cellules basales, en forme d'alène, et les cellules superficielles.
- La couche la plus interne (basale) est constituée de petites cellules denses et cylindriques, sans noyau visible. Les limites des cellules basales sont claires et lumineuses.
- La couche intermédiaire est constituée de deux ou trois couches de cellules épineuses (ailées) présentant des invaginations profondes dans lesquelles s'intègrent les excroissances des cellules voisines. Au microscope, les limites cellulaires sont assez clairement visibles, et les noyaux peuvent être flous ou non définis.
- La couche superficielle de l'épithélium est constituée d'une ou deux couches de cellules polygonales aux limites nettes et à la densité homogène. Les noyaux sont généralement plus brillants que le cytoplasme, où l'on distingue également un anneau périnucléaire sombre.
Parmi les cellules de la couche superficielle, on distingue les cellules sombres et les cellules claires. Une réflectivité accrue des cellules épithéliales indique une diminution de leur métabolisme et un début de desquamation.
La membrane de Bowman est une structure transparente qui ne réfléchit pas la lumière, il est donc normalement impossible de la visualiser avec la microscopie confocale.
Le plexus nerveux sous-basal est situé sous la membrane de Bowman. Normalement, les fibres nerveuses apparaissent comme des bandes lumineuses parallèles sur fond sombre, en contact les unes avec les autres. La réflectivité (réflectivité) peut être irrégulière le long de la fibre.
Le stroma cornéen occupe 80 à 90 % de l'épaisseur de la cornée et est constitué de composants cellulaires et extracellulaires. Les principaux éléments cellulaires du stroma sont les kératocytes; ils représentent environ 5 % du volume.
Une image microscopique typique du stroma comprend plusieurs corps ovales irréguliers et brillants (noyaux de kératocytes) situés dans l'épaisseur d'une matrice transparente gris foncé ou noire. Normalement, la visualisation des structures extracellulaires est impossible en raison de leur transparence. Le stroma peut être divisé en sous-couches: antérieure (située directement sous la membrane de Bowman et représentant 10 % de l'épaisseur du stroma), antéro-moyenne, moyenne et postérieure.
La densité moyenne des kératocytes est plus élevée dans le stroma antérieur, diminuant progressivement vers les couches postérieures. La densité des cellules stromales antérieures est presque deux fois supérieure à celle des cellules stromales postérieures (si la densité des cellules stromales antérieures est prise à 100 %, alors la densité des cellules stromales postérieures sera d'environ 53,7 %). Dans le stroma antérieur, les noyaux des kératocytes ont une forme de haricot arrondi, tandis que dans le stroma postérieur, ils sont ovales et plus allongés.
La luminosité des noyaux des kératocytes peut varier. Leur capacité à réfléchir la lumière varie selon leur état métabolique. Les cellules les plus brillantes sont considérées comme des kératocytes activés (cellules de stress), dont l'activité vise à maintenir l'homéostasie interne de la cornée. Dans le champ visuel normal et le champ visuel, on trouve des cellules activées isolées.
Les fibres nerveuses du stroma cornéen antérieur sont visualisées sous forme de bandes homogènes brillantes, formant souvent des bifurcations.
La membrane de Descemet est normalement transparente et n'est pas visualisée par microscopie confocale.
L'épithélium postérieur est une monocouche de cellules plates hexagonales ou polygonales avec une surface uniformément claire sur un fond de limites intercellulaires claires et sombres.
L'appareil a la capacité de calculer manuellement ou automatiquement la densité cellulaire, leur surface et leur coefficient de variabilité.
Modifications pathologiques de la structure de la cornée
Le kératocône se caractérise par des modifications importantes de l’épithélium antérieur et du stroma de la cornée.
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