Virus de l'hépatite A

L'hépatite virale A est une maladie infectieuse humaine caractérisée par une atteinte hépatique prédominante et une intoxication et une jaunisse manifestées cliniquement. Le virus de l'hépatite A a été détecté en 1973 par S. Feinstone (et d'autres) en utilisant la méthode de la microscopie électronique à immunité et en infectant des singes - des chimpanzés et des marmousets. L'essence de la méthode de la microscopie immunologique électronique est que des anticorps spécifiques (sérum de convalescence) sont ajoutés au filtrat des fèces du patient atteint d'hépatite A et que le précipité est soumis à la microscopie électronique. En raison de l'interaction des virus avec des anticorps spécifiques, ils subissent une agrégation spécifique. Dans ce cas, ils sont plus faciles à détecter, et l'agrégation sous l'influence d'anticorps confirme la spécificité du pathogène. La découverte de S. Feinstone a été confirmée dans des expériences sur des volontaires.

Le virus de l'hépatite A a une forme sphérique, le diamètre du virion est de 27 nm. Le génome est représenté par un ARN positif simple brin avec une masse de 2,6 MD. Supercapsid est absent. Le type de symétrie est cubique - icosaèdre. La capside possède 32 capsomères, elle est formée de quatre polypeptides (VP1-VP4). Par ses propriétés, le virus de l'hépatite A appartient au genre Heparnovirus, la famille des Picornaviridae. Antigénique, le virus de l'hépatite A (VHA - virus de l'hépatite A) est homogène. HAV se multiplie bien dans le corps des chimpanzés, des babouins, des hamadryls et des singes de jeu (marmousets). Pendant longtemps, le virus n'a pas pu se développer. Seulement dans les années 1980. Il était possible d'obtenir des cultures cellulaires dans lesquelles le HAV se propage. Initialement, à ces fins, des lignées rénales transplantées du rein de singe rhésus (culture FRhK-4) ont été utilisées, et maintenant - la lignée transplanté de cellules rénales de singes verts (culture 4647).

Selon les recommandations des experts de l'OMS, la nomenclature suivante des marqueurs du virus de l'hépatite A a été adoptée: les anticorps anti-virus de l'hépatite A-NAU du virus de l'hépatite A: IgM anti-NAV et IgG anti-NAV.

Le VHA est constitué de petites particules d'un diamètre de 27-30 nm, ayant une symétrie icosaédrique et une homogénéité. Sur le diagramme de diffraction d'électrons obtenu par la méthode d'agrégation immunitaire, on détecte des particules denses aux électrons avec des capsomères disposés symétriquement situés de manière superficielle. Avec un contraste négatif, des particules complètes et vides sont détectées dans les préparations. La Nucleocapsid NAV, contrairement à la grippe, n'a pas de saillies de surface et de membranes. Il est également important que le virion HAV n'ait pas de structure en forme de coeur.

Selon ses propriétés physico-chimiques de l'hépatite A est lié à la famille des Picornaviridae, genre entérovirus avec le numéro atomique 72. Cependant, cette taxonomie était trop rare, et l'OMS a jugé possible de laisser la terminologie « hépatite A ».

Comme tous les virus de la famille des Picornaviridae, le virus de l'hépatite A contient de l'acide ribonucléique. Certains laboratoires ont montré la possibilité de cloner le génome du virus de l'hépatite A, ce qui ouvre la perspective d'obtenir des préparations vaccinales.

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Résistance du virus de l'hépatite A

Le virus est relativement résistant aux hautes températures, aux acides, aux graisses dissolvantes (il n'y a pas de lipides), aux désinfectants, il tolère bien les basses températures. Tout cela contribue à sa préservation à long terme dans l'environnement extérieur. A la température ambiante, il survit pendant plusieurs semaines, à 60 ° C perd partiellement son pouvoir infectieux après 4 à 12 heures, complètement - après quelques minutes à 85 ° C. Très résistant au chlore, grâce auquel il est capable de pénétrer dans l'eau du robinet à travers les barrières des stations d'épuration.

Pour résumer toutes les données, nous pouvons caractériser le virus de l'hépatite A comme suit:

• le maître naturel est l'homme;
• animaux expérimentaux - marmotte, chimpanzé;
• source d'infection - excréments;
• maladie - épidémique et endémique;
• la voie de transmission est fécale-orale;
• période d'incubation - 14-40 jours;
• transition vers l'hépatite chronique - pas noté.

Les propriétés immunologiques de la VNI sont les suivantes:

• Prototypes de souches - Ms-l, CR-326, GVG. Tous sont immunologiquement similaires ou identiques;
• Les anticorps - IgM et IgG, sont produits en réponse à l'introduction de protéines structurales du virus et sont protecteurs;
• I L'action trophique de la y-globuline sérique humaine - protège ou atténue la maladie dans les conditions d'administration avant l'infection ou pendant la période d'incubation.

Les caractéristiques physico-chimiques de NAU sont les suivantes:

• La morphologie est une particule sphérique non-coque avec symétrie cubique, la capside est constituée de 32 capsomères;
• Le diamètre est de 27-30 nm;
• La densité en CsCl (g / cm3) est de 1,38-1,46 (particules ouvertes), 1,33-1,34 (virion mature), 1,29-1,31 (virions immatures, particules vides);
• Le coefficient de sédimentation est de 156 à 160 virions matures;
• Acide nucléique - ARN linéaire simple brin;
• Masse moléculaire relative - 2,25 106-2,8 106KD;
• Le nombre de nucléotides est de 6 500-8 100.

La stabilité de la NAV dans les effets physico-chimiques est la suivante:

• Chloroforme, éther - est stable;
• Chlore, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - inactivation partielle;
• Chloramine, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - inactivation complète;
• Formaline, 1: 4000, 35-37 ° C, 72 heures - inactivation complète, 1: 350, 20 ° C, 60 min - inactivation partielle.

Température:

• 20-70 ° C - stable;
• 56 ° С, 30 minutes - il est stable;
• 60 ° C, 12 heures - inactivation partielle;
• 85 ° C, 1 min - inactivation complète;
• Autoclavage, 120 ° C 20 minutes - inactivation complète;
• Chaleur sèche, 180 ° C, 1h - inactivation complète;
• UV, 1,1 W, 1 min - inactivation complète.

Les données présentées montrent que les propriétés physicochimiques du virus de l'hépatite A sont les plus proches des entérovirus. Comme d'autres entérovirus, le VHA est résistant à de nombreuses solutions désinfectantes, complètement inactivé pendant plusieurs minutes à 85 ° C et passé à l'autoclave.

Il a prouvé que le virus de l'hépatite A peut se reproduire dans des cultures monocouches primaires et continues de lignées cellulaires humaines, et le singe. Reproduction particulièrement active de l'hépatite A virus dans des cultures in vitro est observée lors de l'utilisation comme matériau de départ extrait patients du foie singes. Toutefois, il convient de noter que dans toutes les expériences selon l'une reproduction de l'hépatite A dans des cultures de période remarquable de longue incubation in vitro dans les passages primaires (-10 à 4 semaines), par la suite accumulation des augmentations de matériel génétique viral, mais les valeurs absolues sont très mineur qui donne lieu à de nombreux chercheurs parlent d'une réplication incomplète de l'hépatite A virus dans des cultures de tissus.

Résumant les données de la littérature sur la reproduction du virus de l'hépatite A dans des cultures non cunéiformes, on peut dire que le fait d'une expérience prolongée du VHA in vitro ne fait aucun doute. Les conditions optimales pour un haut niveau stable de réplication virale n'ont pas été définitivement identifiées, ce qui contraint l'étude de ses propriétés biologiques, la production d'une source de réactifs pour la production de diagnostics et la conception de vaccins.

En même temps, des jugements plus optimistes sur ce problème peuvent être trouvés dans la littérature. La solution de tous les problèmes liés à la culture du virus de l'hépatite A est un problème dans un proche avenir. Lorsque l'on étudie les conditions optimales HAV propagation dans la culture cellulaire singes rhésus de rein embryonnaire révélé deux phases: la phase de la production de virus infectieux (jusqu'à 6-8 jours au cinquième passage) et la phase d'accumulation intensive de l'antigène viral. Il est également montré que l'accumulation la plus significative de l'antigène viral se produit dans les conditions de ce que l'on appelle la culture en rouleau (bouteilles rotatives). Cette voie ouvre de larges possibilités d'obtention d'un antigène culturel en grandes quantités, et par conséquent, un matériau de départ pour la préparation de systèmes de diagnostic et la fabrication de préparations vaccinales apparaîtra.

Épidémiologie de l'hépatite A

Le virus de l'hépatite A a une forte pathogénicité pour les humains. Selon la conclusion de l'OMS (1987), pour le début de la maladie, il suffit d'infecter un seul virion. Cependant, la dose infectieuse pratique est probablement beaucoup plus élevée. La source de l'infection est seulement une personne infectée. Le virus est libéré en grandes quantités avec les selles 12-14 jours avant l'apparition de la jaunisse et dans les 3 semaines. Période ictérique. Des différences significatives dans l'isolement du pathogène chez les patients présentant des formes ictériques, ictériques et asymptomatiques de l'hépatite A n'ont pas été identifiées. La méthode d'infection est fécale-orale, principalement aqueuse, ainsi que par les voies ménagères et alimentaires. La méthode d'infection est fécale-orale, principalement aqueuse, ainsi que par les voies ménagères et alimentaires. La principale voie de transmission (primaire) du virus est l'eau. Il est également possible d'infection aéroportée. La susceptibilité de la population est universelle. La plupart des enfants de moins de 14 ans sont malades. La maladie a une saisonnalité prononcée entre l'automne et l'hiver.

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Les symptômes de l'hépatite A

La période d'incubation varie de 15 à 50 jours, ce qui dépend de la quantité de la dose infectieuse du virus, mais en moyenne 28-30 jours. Une fois dans le corps, l'hépatite A virus se réplique dans les ganglions lymphatiques régionaux, dans le sang et aux cellules du foie et provoque une hépatite aiguë diffuse qui est accompagné par des lésions des hépatocytes et des cellules réticulo-endothéliales et une diminution de ses fonctions de détoxification et de barrière. Les dommages aux hépatocytes ne se produisent pas en raison de l'action directe du virus, mais à la suite de mécanismes immunopathologiques. L'image la plus typique de l'hépatite A est aigu forme cyclique icteric: la période d'incubation, le prodromique (pré-ictérique), la jaunisse et la période de convalescence. Cependant, dans les foyers d'infection révèle un grand nombre de patients avec des formes asymptomatiques et anictériques d'infection, dont le nombre l'emporte sur icteric ( « phénomène iceberg »).

L'immunité post-infectieuse est forte et de longue durée, causée par des anticorps neutralisants viraux et des cellules de mémoire immunitaire.

Diagnostic microbiologique de l'hépatite A

Le diagnostic de l' hépatite A ( à l' exception des animaux d'infection - les chimpanzés marmozet, babouins, que nous avons) sur la base de diverses méthodes immunologiques: méthode immunofluorescence DGC, hémagglutination adhérence immunitaire (complexe d'antigène viral + anticorps en présence du complément adsorbé sur érythrocytes et provoque leur adhésion) . Cependant, l'applicabilité de ces méthodes est limitée en raison de l'absence d'antigènes viraux spécifiques et réaction nécessite immunofluorescence des biopsies du foie, ce qui est indésirable. Fiable et spécifique est la méthode de la microscopie électronique à l'immunité, mais elle est très laborieuse. Par conséquent, jusqu'à ce que la seule méthode acceptable pour la réaction immunologique est dosage immuno phase solide sous la forme d'IPM, ou RIM, en particulier dans la modification de la « capture » de l' immunoglobuline M. Dans notre pays pour ce système de test objectif proposé - « DIAG-A-GEO ». Le principe de fonctionnement de ce système de test est le suivant. Sur les murs de polystyrène lunochek sorbés premiers anticorps aux immunoglobulines de classe M (antiimmunoglobuliny M) est ensuite ajouté au sérum du patient étudié. S'il y a IgM classe d' anticorps, ils se lient à un à un anticorps-Ti-M, puis on ajoute l' antigène viral particulier (hépatite A virus), qui est obtenu par la croissance dans la culture cellulaire. Le système est lavé et des anticorps antiviraux marqués à la peroxydase de raifort y sont ajoutés. Si les quatre composants du système interagissent, un "sandwich" à quatre couches se produit:

• anti-immunoglobulines M,
• immunoglobulines M (contre le virus de l'hépatite A - dans le sérum d'épreuve du patient),
• antigène viral,
• des anticorps antiviraux marqués avec une enzyme.

Pour détecter ce complexe, un substrat pour l'enzyme est ajouté aux lunettes. Sous l'influence de l'enzyme, il est détruit et un produit coloré est formé. L'intensité de la couleur peut être mesurée quantitativement avec un spectrophotomètre ou un photocolorimètre.

L'avantage de la méthode de "capture" de l'IgM est que les anticorps de cette classe d'immunoglobulines apparaissent à la réponse immunitaire primaire et indiquent un stade actif de l'infection, ils disparaissent après la maladie transférée . En revanche, les anticorps antiviraux appartenant à la classe des IgG persistent longtemps après la maladie, fournissant l'immunité acquise. Pour la détection du virus de l'hépatite A, une méthode de sonde ADN a été proposée: un ARNv complémentaire est utilisé comme sonde d'ADN.

Traitement de l'hépatite A

En raison du fait que la production d'interféron est perturbée dans l'hépatite virale, le traitement de l'hépatite A est basé sur l'utilisation de l'interféron et de l'inducteur de sa synthèse endogène amixine.

Prévention spécifique de l'hépatite A

Auparavant largement appliquée seroprevention l' hépatite A en utilisant gammaglobulines ne se justifiait pas, cependant, l'accent a été mis sur la tenue de vaccination, porté la vaccination contre l' hépatite A. A cette fin, diverses variantes de vaccins sont en cours de développement et sont déjà utilisées. En Russie, un vaccin efficace contre l'hépatite A a été obtenu en 1995, et maintenant il a été appliqué avec succès.