Recherche immunologique en urologie

L'attribution d'un immunogramme à un patient urologique signifie que le médecin traitant suppose la présence de perturbations dans le système immunitaire. Dupliquer les infections bactériennes, virales, fongiques, des réactions allergiques, les maladies systémiques peuvent être des symptômes de ces troubles, qui sont caractérisés par un certain nombre de syndromes (infection, cancer, allergiques, auto-immune, lymphoprolifératif). Un patient peut avoir plusieurs syndromes. Par exemple, les maladies infectieuses chroniques (syndrome infectieux) peuvent causer une carence immunitaire et un déficit immunitaire peut se manifester une prédisposition aux maladies infectieuses et le cancer (Cancer Syndrome). La prédisposition aux infections peut survenir dans un contexte d'immunodéficience secondaire, qui s'est développée à la suite d'une maladie lymphoproliférative, par exemple, la leucémie. Il y a trois groupes principaux de changements pathologiques dans le système immunitaire:

• l'insuffisance quantitative ou fonctionnelle de l'un ou l'autre lien d'immunité, qui conduit au développement d'un état d'immunodéficience;
• une violation dans la reconnaissance de l'antigène par le système immunitaire, conduisant au développement de processus auto-immuns;
• réaction immunitaire hyperréactive ou «pervertie», qui se manifeste par le développement de maladies allergiques.

Il existe des méthodes de dépistage (tests de niveau 1) et de qualification (tests du niveau 2) d'immunodiagnostic. Les premiers existent pour réparer les violations dans le système immunitaire, le second - pour établir les mécanismes impliqués dans leur mise en œuvre dans le but de poursuivre l'immunocorrection.

B-Cellulaire de l'immunité

Méthodes de dépistage

• Détermination du nombre relatif et absolu de lymphocytes B par immunofluorescence ou du débit en utilisant la cytométrie anticorps monoclonaux dirigés contre des antigènes de cellules B (CD19, CD20, dans lequel le CD - groupe de différenciation). La teneur en lymphocytes B est normale chez les adultes: 8-19% du nombre total de leucocytes ou 190-380 cellules / ul. L'augmentation de la teneur en lymphocytes B se produit dans les infections bactériennes et fongiques aiguës et chroniques, les maladies chroniques du foie, les maladies du tissu conjonctif, la leucémie lymphocytaire chronique, le myélome multiple.
• Détermination de la concentration d'immunoglobulines de (F, M, G, E) par simple immunodiffusion radiale, ou turbometrii néphélométrie, dosage radio-immunologique ou immuno-enzymatique (EIA). Normes pour les adultes: Immunoglobuline (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Une augmentation de la concentration en immunoglobulines se produit avec les mêmes conditions pathologiques dans lesquelles une augmentation de la teneur en lymphocytes B se produit. La réduction de la concentration des immunoglobulines se trouve dans une hypogammaglobulinémie congénitale, les tumeurs du système immunitaire, la suppression de la rate, de la perte des protéines, des maladies des reins ou les intestins, le traitement par cytostatiques et immunodepreesantami.

Spécification des méthodes

• Détermination des complexes immuns circulants dans le sang par précipitation sélective dans du polysilène glycol suivie d'un test de densité spectrophotométrique (normale 80-20 UE). L'augmentation des complexes immuns circulants est caractéristique des infections aiguës bactériennes, fongiques, virales, auto-immunes, des maladies immunocomplexes, des maladies sériques, des réactions allergiques de type 3;
• Détermination des immunoglobulines spécifiques dans le sang par rapport à des antigènes bactériens et viraux, l'acide désoxyribonucléique (ADN) dans les maladies auto-immunes, l'identification des spermatozoïdes (infertilité auto-immune) et des anticorps protivopochechnyh (pyélonéphrite et la glomérulonéphrite) par immunodiffusion radiale ou ELISA.
• Détermination des anticorps anti-spermatozoïdes dans le sperme [test MAR (réaction antiglobuline mixte)], la norme est négative.
• Détermination de la concentration d'immunoglobulines dans l'urine à des fins de diagnostic différentiel entre la pyélonéphrite et la glomérulonéphrite (sélectivité de la protéinurie).
• Détermination des IgE dans le suc de la prostate pour le diagnostic de la prostatite allergique par immunodiffusion radiale ou ELISA. 
• La recherche en réponse réaction de blasttransformation des lymphocytes B sur un mitogene de lymphocytes B (pokeweed mitogen pour la stimulation de la réaction de blasttransformation des lymphocytes B en présence de lymphocytes T), dans lequel la valeur standard de 95 à 100%.

Lien T de l'immunité

Méthodes de dépistage

• Détermination du nombre relatif et absolu de réaction de lymphocytes T matures CD3 par immunofluorescence ou d'écoulement cytofluorométrie en utilisant des anticorps monoclonaux anti-SDZ. La norme pour les adultes est de 58-76% ou 1100-1700 cellules / μl. La diminution du nombre de lymphocytes T est un indicateur de l'insuffisance du lien cellulaire de l'immunité. Ceci est caractéristique de plusieurs déficits immunitaires primaires et secondaires (infections bactériennes et virales chroniques: la tuberculose, l'acquisition du syndrome d'immunodéficience, le cancer, l'insuffisance rénale chronique, un traumatisme, le stress, le vieillissement, la malnutrition, le traitement avec des médicaments cytotoxiques, les rayonnements ionisants). Une augmentation du nombre de lymphocytes T se produit dans un contexte d'hyperactivité de l'immunité ou dans les maladies lymphoprolifératives. Avec l'inflammation, le nombre de lymphocytes T augmente d'abord, puis diminue. L'absence d'une diminution des lymphocytes T suggère une chronique du processus inflammatoire.
• Évaluation des sous-populations de lymphocytes.
  • Détermination du nombre de T-helpers (anticorps anti-CD4). Normalement, 36-55% ou 400-1100 cellules / ul. Une augmentation du nombre de ces cellules se produit dans les maladies auto-immunes, la maladie de Waldenström, l'activation de l'implantation anti-greffe; réduction du nombre de lymphocytes T auxiliaires se produit dans les infections chroniques bactériennes, virales, protozoaires, la tuberculose, le syndrome acquis de déficience immunitaire, les tumeurs malignes, les brûlures, les traumatismes, la malnutrition, le vieillissement, le traitement des cytostatiques, des rayonnements ionisants.
  • Détermination du nombre de suppresseurs de T (anticorps anti-CD4). Normalement, 17-37% ou 300-700 cellules / μl. Une augmentation du nombre de suppresseurs de T se produit avec les mêmes conditions dans lesquelles le nombre de T-helpers diminue, et leur diminution dans les mêmes conditions, lorsque le contenu de T-helpers augmente.
  • Indice immunorégulateur CD4 / CD8, dans la norme 1,5-2,5. Hyperactivité à des taux supérieurs à 2,5 (maladies allergiques et auto-immunes); hypoactivité - moins de 1,0 (prédisposition aux infections chroniques). Au début du processus inflammatoire, l'indice immunorégulateur augmente, et quand il diminue, il se normalise.

Spécification des méthodes

• Détermination du nombre de tueurs naturels (cellules NK) - anticorps anti-CD16 et anti-CD56. La norme pour les lymphocytes CD 16 est 6-26%, CD56 - 9-19%. L'augmentation du nombre de cellules NK se produit dans le rejet de greffe, diminuer - dans les infections virales, le cancer, les déficits immunitaires primaires et secondaires, les brûlures, les traumatismes et le stress, le traitement avec des cytostatiques et des rayonnements ionisants. 
• Détermination du nombre de lymphocytes T avec le récepteur de l'interleukine 2 (marqueur d'activation) - anticorps anti-CD25. La norme est de 10-15%. Une augmentation de leur nombre est observée dans les maladies allergiques, le rejet de greffe, la réponse aux antigènes thymodépendants dans la période aiguë de l'infection primaire, la diminution des mêmes maladies dans lesquelles le nombre de cellules NK diminue.
• Examen de l'expression du marqueur d'activation - la molécule d'histocompatibilité de classe II HLA-DR. L'expression accrue se produit dans les processus inflammatoires, chez les patients atteints d'hépatite C, la maladie coeliaque, la syphilis, les infections respiratoires aiguës.
• Évaluation de l'apoptose des lymphocytes. Une indication de l'état de préparation de l'apoptose des lymphocytes peuvent être identifiés par leur expression de surface des récepteurs Fas (CD95) dans les mitochondries et le protooncogène bd-2. L'apoptose a été évaluée par traitement des lymphocytes deux colorants fluorescents: iodure de propidium, qui se lie aux fragments d'ADN et l'annexine Y, la liaison à la phosphatidylsérine sur la membrane cellulaire apparaissant au début de l'apoptose. L'évaluation des résultats est réalisée sur un cytofluorimètre en flux. Le calcul des résultats est basé sur le rapport des cellules colorées avec divers colorants. Cellules non colorées sont des cellules viables, associées uniquement avec le annexine Y, - les premiers signes de l'apoptose, avec l'iodure de propidium et annexine I - manifestations tardives de l'apoptose, la coloration que l'iodure de propidium indique une nécrose.
• Evaluation de la prolifération des lymphocytes T in vitro.
  • Le changement dans la blastogenèse cellulaire est une réaction de la transformation blastique des lymphocytes. Les leucocytes sont incubés avec n'importe quel mitogène d'origine végétale (lectines). Plus couramment utilisé phytohémagglutinine pendant 72 heures, puis faire un frottis, le colorer et compter le nombre de blasts! L'indice de stimulation est le rapport entre le pourcentage de cellules transformées dans l'expérience (culture avec phytohémagglutinine) et le pourcentage de cellules transformées dans le contrôle (culture sans phytohémagglutinine). La réaction de la transformation blastique des lymphocytes peut être évaluée par l'inclusion d'un marqueur radioactif (ZN-thymdine) dans les cellules cultivées, à mesure que la synthèse de l'ADN augmente lors de la division des cellules. Les perturbations de la réponse proliférative se produisent à la fois dans les immunodéficiences primaires et secondaires associées aux infections, aux maladies oncologiques, à l'insuffisance rénale et aux interventions chirurgicales.
  • L'évaluation de ces études, l'expression de marqueurs d'activation (CD25, récepteur de la transferrine à - CD71) et des molécules CMH de classe II HLA-DR, qui sont sensiblement absent sur les lymphocytes T au repos. Les lymphocytes T stimulés par la phytohémagglutinine après ont été analysés dans les 3 jours marqueurs d'activation de l'expression par immunofluorescence directe ou indirecte, de cytométrie en flux en utilisant des anticorps monoclonaux sécrétés récepteurs.
  • Mesurer la quantité de médiateurs synthétisés par les lymphocytes T activés [interleukine (IL) 2, l'IL-4, IL-5, IL-6, l'interféron-gamma, etc.], par dosage radioimmunologique ou ELISA. L'évaluation de la concentration en y-interféron et en IL-4 en tant que marqueurs de TH et Th2 dans le surnageant des cultures activées et dans la cellule est particulièrement importante. Si possible, il est utile de déterminer l'expression du gène de la cytokine concernée par le niveau de l'acide ribonucléique messager dans la cellule produisant la thréonine et intensités expression des récepteurs pour les cytokines respectives.
    
• La réaction de l'inhibition de la migration des lymphocytes. Lymphocytes T sensibilisés dans la réaction avec les lymphokines de libération d'antigène, y compris les facteurs. Inhiber la migration des lymphocytes. Le phénomène d'inhibition est observé lorsque des mitogènes sont introduits dans la culture de cellules. L'évaluation du degré d'inhibition permet de juger de la capacité des lymphocytes à libérer des cytokines. Normalement, la fréquence de migration, en fonction du mitogène spécifique, est de 20 à 80%.
• Evaluation de la cytotoxicité des cellules NK. Déterminer la capacité des cellules tueuses naturelles à tuer les cellules cibles de la lignée érythromyéloïde K-562. Si la cytotoxicité dépendante de l'anticorps est évaluée, des cellules cibles recouvertes d'anticorps IgG sont utilisées. Les cellules cibles sont marquées avec de la 3H-uridine et incubées avec des cellules effectrices. La mort des cellules cibles est estimée à partir de la libération du marqueur radioactif dans la solution. La réduction de la cytotoxicité se produit avec les néoplasmes malins. Dans certains cas, lorsqu'un pronostic de l'efficacité du traitement par les interleukines est requis, la cytotoxicité des cellules NK est évaluée lors de l'incubation avec certaines cytokines.

Investigation de la fonction des phagocytes

Méthodes de dépistage

Investigation de l'absorption des cellules microbiennes par les phagocytes (phagocytose des particules de latex, culture test de staphylocoques, Escherichia coli, ou micro-organismes isolés du patient). En centrifugeant le sang héparinisé, on isole une suspension de leucocytes, on ajoute du sérum du groupe sanguin IV pour l'opsonisation (les opsonines sont des protéines qui augmentent la phagocytose). La suspension microbienne est diluée, mélangée avec des leucocytes et incubée pendant 120 min, échantillonnage pour l'analyse après 30.90.120 min après le début de l'incubation. Des suspensions de leucocytes sélectionnés font des frottis. Déterminer les indicateurs suivants de la phagocytose:

• indice phagocytaire - le pourcentage de cellules qui sont entrées en phagocytose en 30 min et 120 min d'incubation; valeur normative de l'index phagocytaire (30) 94% de l'index phagocytaire (120) - 92%;
• nombre phagocytaire - le nombre moyen de bactéries qui sont intracellulaires; la valeur normative du nombre phagocytaire (30) 11%, le nombre phagocytaire (120) - 9,8%;  
• coefficient de nombre phagocytaire - rapport du nombre phagocytaire (30) au nombre phagocytaire (120); normale 1,16;
• l'indice bactéricide des neutrophiles est le rapport entre le nombre de microbes tués à l'intérieur des phagocytes et le nombre total de microbes absorbés; dans la norme de 66%.

Spécification des méthodes

• L'étude de l'activité bactéricide des phagocytes dans l'essai avec le nitrosine tétrazolium (NST) est le test NST. Aux leucocytes, le colorant protoxyde d'azote tétrazolium est ajouté en jaune. Lorsque le colorant est absorbé par le neutrophile, le processus de réduction se produit sous l'action des radicaux libres de l'oxygène, ce qui entraîne une coloration bleue. La réaction est réalisée dans une plaque à fond plat à 96 puits. Dans les trois premiers puits avec un mélange d'HCT et de leucocytes, on ajoute la solution de Hanks (HCT spontanée), dans celle-ci - des particules de latex; incuber à 37 ° C pendant 25 minutes. Les résultats sont lus à 540 nm sur le lecteur et exprimés en unités conventionnelles. Calculer le facteur de stimulation (K _st ), égal au rapport de la densité optique dans les puits stimulés à la densité optique moyenne dans les puits sans stimulation. Chez les personnes en bonne santé, _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Investigation des molécules d'adhésion. A l'aide de la cytofluorimétrie en flux, l'expression des antigènes de surface CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 est déterminée. Les immunodéficiences avec violation de l'adhérence se manifestent par des infections récurrentes, une cicatrisation lente des plaies et l'absence de pus dans les foyers d'infection.

Investigation du système du complément

Méthodes de dépistage

Détermination de l'activité hémolytique du complément - une étude de la voie classique de l'activation du complément. Différentes dilutions du sérum du patient et d'une personne saine sont ajoutées aux érythrocytes d'un bélier recouvert d'anticorps. Une unité d'activité hémolytique est prise comme l'inverse de la dilution du sérum, dans laquelle 50% des érythrocytes sont détruits. Le degré d'hémolyse est évalué photométriquement par le rendement en hémoglobine dans la solution. On observe une réduction de l'activité hémolytique du complément dans le lupus érythémateux systémique avec atteinte rénale, glomérulonéphrite aiguë. Immunodéficiences combinées, la myasthénie, l'hépatite virale, les lymphomes, augmentent - avec un ictère obstructif, thyroïdite Hashimoto. Rhumatisme, polyarthrite rhumatoïde, périartérite nodulaire. Dermatomyosite, infarctus du myocarde, colite ulcéreuse, syndrome de Reiter, goutte.

Spécification des méthodes

• Détermination des composants du complément. La détermination quantitative est réalisée par la méthode d'immunodiffusion radiale et de néphélométrie.
  L'étude n'est pas informative, à moins que les propriétés antigéniques des composants du complément ne soient modifiées.
• Il a été trouvé que le composant Clq du complément augmente la phagocytose et induit la cytotoxicité cellulaire. Sa diminution se produit dans les maladies des complexes immuns, le lupus érythémateux disséminé, les infections purulentes et les tumeurs.
• Le composant C3 participe à l'activation de la voie du complément classique et alternative. La réduction de sa concentration est associée à des infections bactériennes et fongiques chroniques, à la présence de complexes immuns circulants ou tissulaires.
• Le composant C4 participe à l'activation de la voie classique. La réduction de sa concentration est associée à une activation prolongée du complexe immunitaire et à une diminution de la concentration de l'inhibiteur C1, qui contrôle l'activation de la voie classique du complément. Une carence en C4 survient avec le lupus érythémateux systémique, une augmentation de C4 se produit avec une maladie rénale, un rejet de greffe, une inflammation aiguë et des maladies du tractus gastro-intestinal.
• C5a est un petit fragment de la molécule C5, séparé de lui par suite de l'activation du système du complément. L'augmentation de sa concentration se produit avec l'inflammation, la septicité, les maladies atopiques et allergiques.
• Cl-inhibiteur est un facteur multifonctionnel. Il contrôle l'activation de la composante C1 du complément, inhibe l'activité de la kallikréine, de la plasmine et du facteur Hageman activé, des protéases Cls et Or. La carence en C1-inhibiteur conduit à un angioedème.
• études complémentaires. Au sérum standard dépourvu de tout composant du complément, le sérum à tester est ajouté et l'activité hémolytique du complément est déterminée. Si l'activité hémolytique n'est pas rétablie à la normale, on pense que l'activité de ce composant du complément dans le sérum de test est réduite.

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