Test NST spontané

Le test NBT (nitrobleu de tétrazolium) est un test cellulaire classique de la fonction des neutrophiles: lors d'une poussée d'oxygène actif, le NBT incolore est réduit en formazan bleu à l'intérieur des cellules. Le nombre de neutrophiles « bleus » et le degré de coloration reflètent indirectement la capacité des phagocytes à produire du superoxyde (l'activité du complexe NADPH oxydase). Le NBT « spontané » est défini comme un test sans stimulateur externe (par exemple, sans ester de phorbol), c'est-à-dire évaluant l'état de préparation initiale des neutrophiles à une poussée oxydative. Historiquement, ce test était utilisé comme test de dépistage de la granulomatose chronique (CGD). medlineplus.gov

Aujourd'hui, le rôle du test NBT dans le diagnostic des déficits immunitaires primaires a été quasiment supplanté par la cytométrie de flux à la dihydrorhodamine-123 (test DHR). Le DHR enregistre quantitativement l'oxydation de la sonde dans chaque cellule, permet de mieux différencier la CGD liée à l'X et de distinguer la CGD du déficit complet en myéloperoxydase grâce aux profils de fluorescence. Les évaluations et descriptions de services mises à jour par les principaux laboratoires de référence considèrent le DHR comme la référence, tandis que le NBT est obsolète, subjectif et moins sensible. testdirectory.questdiagnostics.com

Néanmoins, dans un certain nombre de centres et de publications, le NST (y compris sa variante « spontanée ») est encore utilisé comme simple test fonctionnel, notamment dans les contextes à ressources limitées ou à des fins de recherche, pour évaluer l'amorçage des neutrophiles lors d'une inflammation. Dans de tels cas, son interprétation est prudente et toujours corrélée aux données cliniques et aux méthodes alternatives .

Que mesure le NST « spontané » et en quoi diffère-t-il du NST « stimulé »?

Le NBT « spontané » correspond au pourcentage de neutrophiles ayant restauré leur NBT sans ajout d'activateurs (tels que le peptide folmimet ou le phorbol 12-myristate 13-acétate). Des valeurs « spontanées » élevées sont interprétées comme un signe de préactivation/d'« amorçage » des phagocytes dans un contexte d'inflammation systémique, de bactériémie, d'infections virales, de réactions du complément ou de stress. Des observations expérimentales et cliniques ont montré un lien entre l'augmentation du NBT « spontané » et l'activation de la voie alternative du complément et les infections systémiques; cependant, l'ampleur de l'effet varie considérablement et dépend de la méthodologie. PubMed

La NBT « stimulée » est réalisée avec l'ajout d'un activateur de poussée respiratoire; normalement, la proportion de neutrophiles NBT-positifs augmente fortement. En cas de déficit en NADPH oxydase (DGC), il n'y a aucune réponse, même au stimulus: les cellules ne restaurent pas la NBT. Ce diagnostic précoce de la DGC était basé sur cette méthode, mais elle a été aujourd'hui remplacée par l'analyse DHR, qui fournit un profil quantitatif de chaque cellule et des profils typiques pour différentes variantes génétiques et le déficit en myéloperoxydase. ncbi.nlm.nih.gov

Important: Un NST « spontané » n’est pas destiné au diagnostic de la GSC et ne permet pas de différencier de manière fiable le portage de la GSC ou des anomalies partielles des valeurs normales. Un NST « spontané » élevé indique uniquement une activation actuelle des neutrophiles, et non la cause ni le pronostic. Par conséquent, dans les décisions cliniques (prescription d’un traitement antibactérien, recherche de la source de l’infection, exclusion d’un déficit immunitaire primaire), cet indicateur ne peut servir que de signal indirect nécessitant des éclaircissements .

Quand l’analyse était-elle nécessaire et comment a-t-elle été remplacée (recommandations modernes)

Historiquement, le NBT servait de marqueur accessible pour le déficit d'oxygénation en cas de suspicion de GSC chez les enfants atteints d'infections bactériennes et fongiques sévères et récurrentes. La norme était considérée comme une coloration bleue quasi complète des neutrophiles après stimulation; l'absence de coloration indiquait une GSC. Cependant, la méthode dépendait du microscopiste, de la coloration et du comptage, identifiait mal les porteurs et produisait des résultats erronés en raison d'erreurs pré-analytiques .

Par conséquent, la pratique internationale a adopté la cytométrie de flux DHR comme norme: cette méthode permet de distinguer clairement les déficits normaux, complets et partiels en NADPH oxydase, facilite le typage de la CGD (formes liées à l'X ou autosomiques récessives) et la distingue même d'un déficit complet en myéloperoxydase grâce à son profil de fluorescence. Dans les revues en cours (2022-2024), la DHR est identifiée comme le test initial clé en cas de suspicion de CGD, confirmée ensuite par analyse moléculaire. ncbi.nlm.nih.gov

Les grands laboratoires pédiatriques de référence ont complètement abandonné le test NBT de leur utilisation courante: les catalogues de tests indiquent que ce test n'est plus disponible et qu'il est remplacé par le test « Neutrophil Oxidative Burst, DHR ». Les recommandations commerciales et universitaires soulignent que, pour une interprétation précise, elles doivent prendre en compte la proportion de cellules DHR positives après stimulation, l'intensité moyenne de fluorescence et le profil de l'histogramme. seattlechildrenslab.testcatalog.org

En pratique, si l'objectif est d'exclure ou de confirmer la CGD (ou le statut de porteur), il faut prescrire un DHR et des tests génétiques; si l'objectif est de surveiller « l'activité immunitaire » pendant les infections, le NST « spontané » n'apportera pas d'informations cliniquement fiables par rapport à l'examen clinique et aux tests standard .

Comment est-elle réalisée, qu'est-ce qui influence les résultats et pourquoi existe-t-il tant d'interprétations controversées?

La technique NST est simple: du sang total est incubé avec un réactif (avec ou sans stimulateur), puis la proportion de neutrophiles colorés dans le frottis est comptée. Le résultat dépend de l'âge de l'échantillon sanguin (le vieillissement réduit la réactivité), de la température, de la composition du milieu, de la présence d'antibactériens et de glucocorticoïdes, ainsi que de la technique de coloration et de la subjectivité du comptage microscopique. Ces facteurs expliquent en partie la variabilité interlaboratoire et intralaboratoire. testdirectory.questdiagnostics.com

Le NBT « spontané » s'accompagne d'une variabilité biologique: l'amorçage des neutrophiles basaux fluctue en fonction de l'inflammation systémique, de l'activation du complément, des infections virales et des facteurs de stress. Des valeurs « spontanées » plus élevées ont été rapportées dans certains groupes (par exemple, avec HTLV-1) et lors d'infections bactériennes aiguës, mais sans la spécificité requise. Un « NBT spontané élevé » isolé ne peut être utilisé comme marqueur diagnostique autonome. SciELO

Une autre source d'erreur réside dans le fait de tenter de traiter en se basant sur le NST. Des études antérieures ont montré que les antibiotiques et les stéroïdes peuvent stabiliser le NST après le début du traitement; à l'inverse, le stress et la préactivation produisent des valeurs spontanées faussement élevées. Par conséquent, les décisions cliniques doivent se fonder sur des critères standardisés (examen clinique, numération formule sanguine, marqueurs inflammatoires, microbiologie, imagerie) et des tests fonctionnels/génétiques ciblés lorsqu'ils sont reconnus comme standard. journals.co.za

Si un laboratoire effectue un test de dépistage non sélectif (par exemple, comme test de secours ou de recherche), il doit fournir des références spécifiques, assurer un contrôle qualité et indiquer clairement que le test ne remplace pas le DHR en cas de suspicion de CGD. De nombreux laboratoires publient cet avertissement directement sur leur fiche de service. seattlechildrenslab.testcatalog.org

Comment interpréter les résultats (scénarios pratiques)

On suspecte une granulomatose chronique. Une réponse faible ou absente à la stimulation de la NST a historiquement soutenu une granulomatose chronique chronique, mais la norme actuelle est la DHR, suivie de la génétique (diagnostic, type d'anomalie, statut de porteur). La NST n'est pas fiable pour le dépistage des porteurs et des formes partielles et peut également être confondue avec un déficit complet en myéloperoxydase. ncbi.nlm.nih.gov

Taux de NBT « spontané » élevé lors d'une infection/inflammation. Cela reflète une préactivation des neutrophiles, mais n'en indique pas la cause: les processus inflammatoires bactériens, viraux et immunitaires peuvent produire des résultats similaires. Les décisions thérapeutiques reposent sur les observations cliniques et microbiologiques; la dynamique du NBT ne constitue pas un critère validé d'efficacité du traitement. diva-portal.org

Un NST normal en présence de signes cliniques d'immunodéficience sévère. Ceci n'exclut pas les anomalies non détectées par le NST, ni les cas où la sensibilité de la méthode est insuffisante. Un diagnostic moléculaire et une DHR des immunodéficiences primaires sont requis .

Limites du laboratoire. Si l'échantillon est livré en retard, mal conservé ou contient des médicaments concomitants (par exemple, des stéroïdes), le résultat du test de dépistage non sélectif (NST) peut être incertain. Le DHR est également sensible à la logistique, mais fournit une vérification quantitative et des schémas typiques. testdirectory.questdiagnostics.com

Par quoi puis-je remplacer le NST et que dois-je écrire dans la référence?

La première ligne d'évaluation d'une poussée oxydative des neutrophiles est la cytométrie de flux DHR, qui précise le stimulateur et analyse le pourcentage de cellules DHR-positives, l'intensité moyenne de fluorescence et la forme de l'histogramme. En cas de suspicion de GSC, l'orientation doit explicitement inclure la question clinique (« exclure la GSC ou le statut de porteur de GSC »), suivie d'examens fonctionnels et d'une confirmation génétique. mayocliniclabs.com

Si l'objectif est un diagnostic infectieux général, le test de la fonction neutrophile (TNF) n'est pas nécessaire: le traitement repose sur les observations cliniques, la numération formule sanguine complète, la protéine C-réactive/procalcitonine, la microbiologie et l'imagerie. Les tests de la fonction neutrophile « immune », sauf suspicion d'anomalie primaire, ne sont pas inclus dans les normes PMC.

Si le laboratoire propose toujours le test NST, il est conseillé de privilégier le test DHR. De nombreux établissements ont officiellement abandonné le test NST et l'ont remplacé par le test Neutrophil Oxidative Burst (DHR). Pour les patients, cela signifie un diagnostic plus précis et un risque réduit de faux positifs. seattlechildrenslab.testcatalog.org

Questions fréquemment posées

• Une NST « spontanée » est-elle nécessaire pour comprendre « à quel point l’immunité est forte »?

Non. Un NST « spontané » élevé indique uniquement que les neutrophiles sont préactivés, et non la force du système immunitaire. Ce test ne permet pas d'évaluer la résistance de l'organisme et n'influence pas les décisions thérapeutiques pour les infections courantes. diva-portal.org

• Si le NST est normal, peut-on exclure une CGD?

Non. Pour exclure une GSC chez un enfant ou un adulte, on utilise une cytométrie en flux (DHR) et un diagnostic moléculaire. Le NST peut être faussement normal en cas de défauts partiels et ne permet pas de déterminer avec fiabilité le statut de porteur. ncbi.nlm.nih.gov

• Pourquoi mon médecin m’a prescrit du DHR et non du NST?

Parce que la DHR est une norme moderne, elle est plus précise, quantitative et informative, permettant de différencier les variantes du déficit en myéloperoxydase. De nombreux laboratoires ne pratiquent plus la NST. mayocliniclabs.com

• Est-il possible de surveiller la dynamique du traitement à l’aide du NST?

En routine, non. La dynamique clinique et des marqueurs validés sont utilisés pour surveiller l'efficacité du traitement contre les infections; le NST utilisé à cette fin n'est pas standardisé et est très variable. journals.co.za

Test activé avec NST

Normalement, chez les adultes, le nombre de neutrophiles HCT positifs est de 40 à 80 %.

Le test NBT activé évalue la réserve fonctionnelle du mécanisme bactéricide oxygéno-dépendant des phagocytes. Ce test permet d'identifier la capacité de réserve des systèmes intracellulaires des phagocytes. Bien que l'activité antibactérienne intracellulaire des phagocytes soit maintenue, une forte augmentation du nombre de neutrophiles positifs au formazan se produit après stimulation au latex. Une diminution du test NBT activé pour les neutrophiles en dessous de 40 % et pour les monocytes en dessous de 87 % indique une phagocytose insuffisante.

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