13c Test à l'uréase: préparation, résultats, positif, négatif

Depuis la découverte de la bactérie Helicobacter pylori associée à la gastrite chronique et aux ulcères gastriques et duodénaux, des méthodes de diagnostic ont été développées, notamment le test à l'uréase, qui permet de détecter ces micro-organismes chez un patient spécifique, de confirmer leur implication dans le développement de maladies gastro-intestinales et de prescrire un traitement efficace.

L'enzyme uréase comme biomarqueur de l'infection à Helicobacter

Les bactéries H. pylori se protègent de l'environnement acide de la lumière gastrique de deux manières. Premièrement, en endommageant la muqueuse avec leurs flagelles, les micro-organismes atteignent ses couches inférieures, jusqu'aux cellules épithéliales, où le pH est plus élevé (c'est-à-dire l'acidité plus faible). Deuxièmement, les bactéries neutralisent l'acidité en synthétisant de grandes quantités d'uréase, une métalloenzyme de haut poids moléculaire à activité catalytique, ou urée amidohydrolase.

L'utilisation de l'uréase dans le diagnostic d'Helicobacter est possible non seulement grâce à l'activité cytoplasmique de cette enzyme, mais également grâce à l'interaction externe avec les cellules hôtes.

Sous l'action de l'uréase, l'urée gastrique se décompose en nitrure d'hydrogène (ammoniac) et en dioxyde de carbone (dioxyde de carbone). Ces composés réagissent avec l'acide chlorhydrique du suc gastrique et créent une zone d'acidité neutre autour de H. pylori, tout en favorisant le métabolisme des cellules bactériennes.

C'est pourquoi l'uréase est le facteur le plus important dans la colonisation de H. pylori dans la muqueuse gastrique humaine, et la détection de l'activité uréolytique est considérée comme un biomarqueur de la virulence de cette bactérie, que les gastro-entérologues - en effectuant un test d'uréase - utilisent pour diagnostiquer l'infection à Helicobacter, ainsi que pour surveiller les résultats de la destruction induite par les médicaments (éradication) des bactéries.

Le diagnostic de H. pylori comprend des tests invasifs et non invasifs, selon qu'un examen endoscopique de l'estomac (fibrogastroduodénoscopie) est nécessaire ou non. Le test invasif est le test rapide à l'uréase (test RUT), qui nécessite un prélèvement de tissus (biopsie). Le test respiratoire à l'urée 13C (13C-UBT) est le test non invasif le plus courant.

Il est à noter que le diagnostic non invasif de H. pylori peut être réalisé à l'aide d'un test sanguin de recherche d'anticorps (spécificité de 75 %, sensibilité de 84 %), d'un test ELISA urinaire (sensibilité de 96 % et spécificité de 79 %) et d'un coprogramme de recherche d'antigènes bactériens. Plus d'informations: Infection à Helicobacter pylori: anticorps anti-Helicobacter pylori dans le sang

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Indications pour la procédure test de l'uréase

La colonisation de la muqueuse gastrique par H. pylori n'est pas en soi une maladie; elle est un facteur d'augmentation de la charge bactérienne dans l'organisme, qui dans certaines conditions peut déclencher le développement d'un certain nombre de pathologies de l'estomac et du tractus gastro-intestinal supérieur.

Les indications diagnostiques de l'infection à Helicobacter, notamment le test à l'uréase, sont associées à la gastrite avec acidité accrue, à la gastrite antrale et atrophique, à la duodénite, à l'ulcère gastrique et à l'ulcère duodénal, ainsi qu'au lymphome gastrique du MALT. Après résection endoscopique d'un cancer gastrique à un stade précoce, un examen histologique peut être réalisé en association avec un test rapide à l'uréase (FGDS).

Les gastroentérologues peuvent prescrire un test d'uréase si les patients se plaignent d'une sensation de lourdeur et d'inconfort dans la région épigastrique, de brûlures d'estomac fréquentes après avoir mangé, d'éructations acides ou pourries, d'amertume dans la bouche, de nausées, de troubles intestinaux, de douleurs ou de crampes dans l'estomac.

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Préparation

La préparation au test respiratoire à l'urée 13C consiste à arrêter: les antibiotiques quatre semaines avant le test, ainsi que les AINS, les inhibiteurs de la pompe à protons (réduisant l'acidité gastrique) et les antiacides ou adsorbants utilisés contre les brûlures d'estomac au moins deux semaines avant. La prise de médicaments doit être interrompue cinq à six jours avant le test, et la consommation d'alcool et de tabac trois jours avant.

Il est également recommandé d'éviter de manger des légumineuses pendant environ une semaine avant le test, car les haricots, les pois, les lentilles, le soja et les haricots contiennent de l'uréase (qui protège les plantes des maladies et des insectes nuisibles).

La veille du test, un dîner copieux et tardif est contre-indiqué; le jour du test, vous devez effectuer une hygiène bucco-dentaire normale et une heure et demie avant le test, vous ne devez rien boire ni utiliser de chewing-gum.

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Technique test de l'uréase

Technique de mise en œuvre:

• Tout d’abord, un échantillon respiratoire de base est prélevé: une expiration est effectuée dans un récipient en plastique souple (et hermétiquement fermé);
• le liquide additionné d'urée 13C est pris par voie orale;
• Après 25 à 30 minutes, un deuxième échantillon d’air expiré est prélevé dans un autre récipient.

Les échantillons ainsi obtenus sont analysés par spectrométrie de masse avec séparation des isotopes dans un second échantillon et détermination de leur concentration. La différence entre les valeurs du second et du premier échantillon est exprimée par delta (δ) par rapport au niveau de référence. Les valeurs normales, c'est-à-dire les valeurs négatives de l'atome marqué 13C chez les patients non infectés, varient de 0,15 à 0,46 %, et les valeurs positives en présence d'infection sont de 1,2 à 9,5 %, avec un taux d'hydrolyse de l'urée supérieur à 12-14 μg/min.

Pour le dire simplement: la détection de dioxyde de carbone marqué au 13C dans l'air expiré indique que l'urée a été hydrolysée par l'enzyme uréase H. pylori, ce qui, en fait, confirme le fait de sa présence dans l'estomac.

Test respiratoire H. pylori

Le test 13C-UBT ou test respiratoire à l'urée 13C pour Helicobacter pylori est l'une des méthodes non invasives les plus importantes pour détecter cette infection: avec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 98 %, le risque de résultats faussement positifs et faussement négatifs par rapport à l'histologie et aux tests d'anticorps sanguins est inférieur de 2,3 %.

L'analyse est basée sur l'hydrolyse de l'urée liquide administrée par voie orale marquée avec un atome de carbone (isotope stable non radioactif) 13C (50-75 mg d'urée 13C diluée dans 100 ml de liquide) par l'uréase de H. pylori.

L'urée marquée par un indicateur isotopique subit une hydrolyse dans l'estomac, libérant de l'ammoniac et du dioxyde de carbone contenant des atomes marqués. Ces derniers se diffusent dans le sang et sont excrétés par les poumons lors de la respiration. Le dioxyde de carbone marqué est enregistré par un appareil d'analyse: un spectromètre de masse, dont le fonctionnement repose sur la spectroscopie isotopique sélective non dispersive, ou un analyseur spectroscopique infrarouge.

Test rapide d'uréase

Le test rapide à l'uréase (TRU) est réalisé lors de l'examen endoscopique de l'estomac et du duodénum, à l'aide d'endofibroscopes modernes, et simultanément au prélèvement d'échantillons de biopsie. Le biomatériau est prélevé dans la partie antrale de l'estomac. La fibrogastroduodénoscopie (FGDS) avec test à l'uréase est donc une méthode diagnostique invasive.

La biopsie obtenue est complètement immergée dans un milieu standardisé préparé contenant du gel d'agar, de l'urée, de la phénolsulfophtaléine, un indicateur acido-basique, et un agent bactériostatique (ajouté pour empêcher la croissance de micro-organismes contaminants et de faux résultats positifs).

Si des bactéries H. pylori sont présentes dans l'échantillon de tissu gastrique, l'uréase qu'elles produisent hydrolyse l'urée et augmente le pH, ce qui est clairement visible lorsque l'indicateur passe du jaune à l'orange (à pH 6,8) et au violet (à pH > 8). 75 % des tests positifs changent de couleur en 120 à 180 minutes, et plus l'indicateur change de couleur rapidement, plus le nombre de bactéries est élevé. Cependant, les tests qui s'avèrent négatifs sont conservés 24 heures.

Test d'uréase rapide positif: qu'est-ce que cela signifie? Un test RUT positif (l'indicateur devient rouge) signifie que l'échantillon de biopsie placé dans le milieu gélosé contient au moins 105 bactéries H. pylori, bien que leur concentration soit généralement plus élevée.

La sensibilité des différentes modifications de test varie entre 90 et 98 %, et la spécificité entre 97 et 99 %.

Comme l'ont noté les gastro-entérologues, si le résultat du patient indique un test d'uréase nettement positif (trois croix), cela signifie: un pH > 8 et un changement de couleur de l'indicateur en moins de 60 minutes après l'immersion de la biopsie, ce qui indique une forte concentration d'H. pylori et une expression élevée de l'uréase. Le nombre approximatif de bactéries peut être compté lors de l'examen histologique de la biopsie au microscope; s'il dépasse 40 à 50 dans la zone visualisée, le niveau d'infection est considéré comme élevé.

Le test respiratoire à l'urée 13C donne rarement des résultats faussement positifs et, chez les patients suspectés d'ulcère gastrique ou duodénal, un test positif est considéré comme confirmant le diagnostic, tandis qu'un résultat négatif doit être confirmé par EGD avec un test à l'urée.