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La PCR comme méthode de diagnostic des maladies génétiques
Dernière revue: 04.07.2025
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La PCR est une nouvelle avancée de la génétique moléculaire. Utilisée pour l'amplification de l'ADN, elle permet la multiplication in vitro rapide d'une région d'ADN spécifique (c'est-à-dire de tout gène d'intérêt) plus de 200 000 fois. Pour réaliser cette réaction, il suffit de disposer de l'ADN d'une cellule; la quantité d'ADN amplifiée par PCR est si importante qu'elle peut être facilement colorée (l'utilisation de sondes radioactives après électrophorèse n'est pas nécessaire). La connaissance de la séquence nucléotidique de la région d'ADN amplifiée est indispensable pour sélectionner correctement les amorces synthétisées artificiellement.
Actuellement, la PCR est un procédé monotube consistant en des cycles répétés d'amplification (reproduction, copie) d'une séquence spécifique d'ADN afin d'obtenir un nombre suffisamment important de copies identifiables par électrophorèse. L'un des composants clés de la réaction est constitué par les « amorces » – des oligonucléotides synthétiques composés de 20 à 30 bases complémentaires des « sites » (zones) d'hybridation (attachement) sur la zone identifiée de la matrice d'ADN.
La PCR s'effectue automatiquement dans un thermocycleur (amplificateur) à thermostat programmable. Ce cycle en trois étapes, qui produit des copies exactes de la section d'ADN matriciel identifiée, est répété 30 à 50 fois conformément au programme du thermocycleur. Lors du premier cycle, les oligoamorces s'hybrident à l'ADN matriciel d'origine, puis (lors des cycles suivants) aux molécules d'ADN nouvellement synthétisées au fur et à mesure de leur accumulation dans le mélange réactionnel. Dans ce dernier cas, la synthèse d'ADN s'arrête non pas suite à un changement de température, mais lorsque la limite d'activité de l'ADN polymérase de la section amplifiée est atteinte, ce qui détermine la taille de la section d'ADN nouvellement synthétisée avec une précision d'un nucléotide.
L'électrophorèse est utilisée comme méthode de détection des molécules d'ADN obtenues, à l'aide de laquelle le matériel amplifié est séparé en fonction de la taille des amplicons (produits d'amplification).
La PCR peut être utilisée pour examiner directement l’emplacement des mutations suspectées ou des sites polymorphes, ainsi que pour étudier la présence de toute autre caractéristique spécifique de l’ADN.
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