Expert médical de l'article
Nouvelles publications
La PCR comme méthode de diagnostic des maladies génétiques
Dernière revue: 23.04.2024
Tout le contenu iLive fait l'objet d'un examen médical ou d'une vérification des faits pour assurer autant que possible l'exactitude factuelle.
Nous appliquons des directives strictes en matière d’approvisionnement et ne proposons que des liens vers des sites de médias réputés, des instituts de recherche universitaires et, dans la mesure du possible, des études évaluées par des pairs sur le plan médical. Notez que les nombres entre parenthèses ([1], [2], etc.) sont des liens cliquables vers ces études.
Si vous estimez qu'un contenu quelconque de notre contenu est inexact, obsolète ou discutable, veuillez le sélectionner et appuyer sur Ctrl + Entrée.
PCR - Les progrès récents de la génétique moléculaire, utilisé pour amplifier l'ADN et vous permet de reproduire rapidement in vitro une région spécifique de l' ADN (c. -à- tout gène d'intérêt) est plus de 200 000 fois. Pour effectuer la réaction, il suffit d'avoir le matériel d'ADN d'une cellule; la quantité d'ADN amplifié par PCR est si grande que cet ADN peut simplement être coloré (en utilisant des sondes radioactives après l'électrophorèse n'est pas nécessaire). Une condition préalable à la réalisation de la PCR est la connaissance de la séquence nucléotidique de la région d'ADN amplifiée pour la sélection correcte des amorces synthétisées artificiellement.
Actuellement, la PCR est un processus qui se déroule dans un seul tube et consiste en des cycles répétés d'amplification (duplication, copie) d'une séquence spécifique de la molécule d'ADN afin d'obtenir un nombre suffisant de copies identifiables par électrophorèse. L'un des composants clés de la réaction est "amorces" - oligonucléotides synthétiques constitués de 20-30 bases, complémentaires de "sites" (sections) d'hybridation (fixation) sur le site identifié de l'ADN matrice.
La PCR se déroule automatiquement dans un thermostat programmable - thermocycleur (thermocycleur). Le cycle en trois étapes, à la suite duquel les copies exactes de la partie identifiable de l'ADN matrice sont obtenues, sont répétés 30 à 50 fois en fonction du programme prédéfini du thermocycleur. Dans le premier cycle, les oligopramères s'hybrident avec l'ADN matrice d'origine, puis (dans les cycles subséquents) et avec les molécules d'ADN nouvellement synthétisées lorsqu'elles s'accumulent dans le mélange réactionnel. Dans ce dernier cas, la synthèse d'ADN ne se termine pas en raison d'un changement du régime de température, mais en atteignant la limite d'ADN polymérase de la région amplifiée, qui détermine la taille de la région d'ADN nouvellement synthétisée à moins d'un nucléotide.
En tant que méthode de détection des molécules d'ADN obtenues, on utilise une électrophorèse, au moyen de laquelle le matériau amplifié est divisé en fonction de la taille des amplicons (produits d'amplification).
A l'aide de la PCR, il est possible d'étudier directement les sites de localisation de mutations suspectées ou de sites polymorphes, et également d'étudier la présence de toute autre spécificité de l'ADN.
[