La vitamine A dans le sang

Les valeurs de référence (norme) de la concentration de vitamine A (rétinol) dans le sérum sanguin: chez les enfants de 1 à 6 ans - 0,7-1,5 μmol / l, 7-12 ans - 0,91-1,71 μmol / l, 13 -19 ans - 0,91-2,51 μmol / l; chez l'adulte, elle est de 1,05-2,09 μmol / l.

La vitamine A concerne liposoluble et existe sous deux formes - la vitamine A réelle ou rétinol (qui se trouve uniquement dans les produits animaux) et pro-vitamine A, connu sous le nom carotène (préparés à partir d'origine animale ou végétale), qui peut être converti en rétinol dans les murs le tube digestif. Environ 50-90% du rétinol pris avec de la nourriture est absorbé dans l'intestin grêle et transporté dans le complexe lié aux chylomicrons vers le foie, où il est stocké sous forme de palmitate de rétinol. Si nécessaire, il est libéré dans la circulation sanguine sous la forme de rétinol, qui est en combinaison avec la protéine de liaison à la vitamine A. Dans le sérum, le complexe protéine de liaison à la vitamine A + rétinol se lie à la transthyrétine. Du sérum, le rétinol est capturé par les cellules cibles, telles que les photorécepteurs rétiniens et l'épithélium.

Lorsque la vitamine A pénètre dans l'organisme au-delà des besoins (180-430 μg de rétinol par jour selon l'âge, le sexe et l'état physiologique), son excès est déposé dans le foie formant le dépôt de cette vitamine. Avec une consommation réduite de rétinol provenant des aliments, ses réserves hépatiques sont libérées dans la circulation sanguine, maintenant la concentration sérique de rétinol à un niveau normal (au-dessus de 0,7 μmol / L). D'autres formes biologiquement actives de vitamine A (rétinal et acide rétinoïque) sont présentes dans le sang à de très faibles concentrations (inférieures à 0,35 μmol / L); sur les esters du rétinol représente environ 5% de la vitamine A totale (0,1-0,1 μmol / l).

La vitamine A joue un rôle important dans les processus d'oxydoréduction. Le rétinol favorise la formation de glycogène dans le foie et les muscles, favorise l'augmentation du cholestérol dans le sang, participe à la synthèse des stéroïdes et des hormones sexuelles. Il est nécessaire pour la croissance et la formation du squelette osseux resynthèse de la rhodopsine, et contribue également au fonctionnement normal des muqueuses et de l'épithélium de la couverture de la peau, ce qui empêche son métaplasie, hyperkératose et desquamation excessive. La vitamine A aide à renforcer les cheveux, les dents et les gencives. Ces dernières années, elle montre le rôle varié de la vitamine A dans la prévention du cancer et de la régulation de l'immunité (essentielle pour l'achèvement de la phagocytose, augmenter la synthèse d'Ig, stimule la production de cellules T tueuses, stimule le type T-helper II et al.). La vitamine A - un antioxydant actif, agissant principalement en présence de vitamine E; il protège la vitamine C de l'oxydation. La carence en vitamine A est considérée comme un facteur de risque pour les néoplasmes malins. Dans des études expérimentales, il a été montré qu'une augmentation de la teneur en vitamine A dans l'alimentation augmente la durée médiane de vie de 17,5%. Le zinc est un cofacteur essentiel du métabolisme de la vitamine A (nécessaire à la synthèse de la protéine liant la vitamine A).

Le besoin quotidien moyen de rétinol pour les adultes (20-50 ans) est de 1,2 mg (4000 UI, 1 UI équivaut à 0,3 μg de rétinol), pour les femmes enceintes - 1,5 mg (5000 UI), pour l'allaitement maternel - 1, 8 mg (6000 UI), pour les personnes de plus de 60 ans - 2,5 mg (10 000 UI). Au moins un tiers des besoins quotidiens en rétinol doit être administré au corps sous forme prête à l'emploi; le reste peut être absorbé par l'utilisation de caroténoïdes, dont le rétinol se forme dans le corps. Il convient de garder à l'esprit qu'environ 30% du rétinol dans les aliments est détruit par leur traitement thermique. L'activité du rétinol est 2 fois supérieure à celle du carotène, de plus, ce dernier n'est absorbé que dans 30 à 40% des cas dans l'intestin. Par conséquent, dans l'évaluation de l'apport alimentaire, il est considéré que 1 mg de rétinol correspond approximativement à 6 mg de caroténoïdes.

Technique

Détermination du rétinol (vitamine A) et des caroténoïdes dans le sérum selon Bessey dans la modification de LA Anisimova

Principe de la méthode

La détermination de la vitamine A et des caroténoïdes est basée sur leur hydrolyse dans une solution d'alcool alcalin, suivie d'une extraction avec un mélange de solvants organiques.

Réactifs

• Solution 11 M d'hydroxyde de potassium (KOH).
• 96% d'alcool éthylique.
• Solution 1 M d'hydroxyde de potassium (KOH) dans de l'alcool éthylique à 96%: 1 volume de solution de KOH 11 M est mélangé avec 10 volumes d'alcool éthylique à 96%. Le réactif est préparé le jour de l'étude. Si une coloration se produit pendant le mélange, l'alcool doit être nettoyé par distillation avant utilisation.
• Xylol, hp.
• Oktan, h.ch.
• Mélange xylène-octane: préparé en mélangeant des volumes égaux de xylène et d'octane.

Les investigations sont effectuées sur un spectrophotomètre.

Le cours de la détermination de la vitamine A

Du sang prélevé sur le doigt (environ 1 ml) est ajouté à l'étiquette de la centrifugeuse et placé dans une coupe en verre avec de l'eau chaude (température de 40 à 45 ° C) pendant 20 à 30 minutes. Pour séparer le sérum, un caillot de sang est soigneusement enroulé autour du bord du tube avec une tige de verre mince et centrifugé à 3000 tours par minute pendant 10 minutes.

Sélectionnez 0,12 ml de sérum et transférez-le dans un tube d'agglutination, puis ajoutez 0,12 ml d'une solution d'hydroxyde de potassium 1 M d'alcool. Le contenu est secoué avec précaution.

Les tubes à essai avec des sondes sont placés dans un bain d'eau pendant 20 minutes à une température de 60 ° C pour l'hydrolyse.

Les échantillons sont refroidis et 0,12 ml d'un mélange xylène-octane leur est ajouté, secoué vigoureusement pendant 10-15 secondes. Refroidir à nouveau et centrifuger.

Retirez délicatement la couche supérieure contenant de la vitamine A et des caroténoïdes avec une pipette Pasteur avec une canette de caoutchouc et de transférer dans des microcuvettes.

Les échantillons sont spectrophotométriques à une longueur d'onde de 328 nm - pour déterminer la vitamine A, et à une longueur d'onde de 460 nm - pour déterminer les caroténoïdes.

Après spectrophotométrie l'échantillon étudié est soumis à un rayonnement ultraviolet pour la destruction de la vitamine A. A cet effet, à une distance de 15-20 cm du microcuvettes en quartz fixé la lampe (bactéricide) de sorte que la partie exposée irradiation de la cuvette, remplie de liquide; le temps d'irradiation est de 45-60 minutes.

Les échantillons sont à plusieurs reprises spectrophotométriques à une longueur d'onde de 328 nm. La teneur en vitamine A est déterminée à partir de la différence de valeurs d'extinction (densité optique), en tenant compte du coefficient (facteur) 637, calculé par Bessey pour la vitamine A.

Le calcul est effectué selon la formule:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

Où X est la teneur en vitamine A, μg / dL; 637 est le coefficient calculé par Bessey pour la détermination de la vitamine A; Е328 (1) - la densité optique de la solution avant l'irradiation; E328 (2) est la densité optique de la solution après irradiation.

Le coefficient de transfert de la concentration de vitamine A de μg / dL en μmol / l est de 0,035.

La teneur en caroténoïdes est calculée par la formule:

X = 480-Е480,

Où X est la teneur en caroténoïdes, μg / dL; 480 est le coefficient calculé par Bessey pour déterminer les caroténoïdes; E480 est la densité optique de la solution d'essai.

Note:

Selon Bessey, des volumes de sérum plus grands ou plus petits peuvent être pris pendant les études, mais son rapport au volume de la solution d'alcool devrait être constant avec n'importe quel changement dans le volume (la quantité) du mélange de xylène-octane.

La norme dans la teneur en vitamine A dans le sérum sanguin est: chez les nouveau-nés et les nourrissons - 160-270 μg / l; chez les adultes, 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). La teneur en caroténoïdes dans le sérum adulte est de 800-2300 μg / l.