Vitamine A dans le sang

Valeurs de référence (norme) pour la concentration de vitamine A (rétinol) dans le sérum sanguin: chez les enfants de 1 à 6 ans - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 ans - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 ans - 0,91-2,51 μmol/l; chez les adultes - 1,05-2,09 μmol/l.

La vitamine A est une vitamine liposoluble et existe sous deux formes: la vitamine A elle-même, ou rétinol (présent uniquement dans les produits animaux), et la provitamine A, appelée carotène (obtenue à partir de produits animaux et végétaux), qui peut être convertie en rétinol dans les parois du tube digestif. Environ 50 à 90 % du rétinol alimentaire est absorbé dans l'intestin grêle et transporté dans un complexe lié aux chylomicrons jusqu'au foie, où il est stocké sous forme de palmitate de rétinol. Au besoin, il est libéré dans la circulation sanguine sous forme de rétinol complexé à une protéine de liaison à la vitamine A. Dans le sérum sanguin, le complexe protéine de liaison à la vitamine A + rétinol se lie à la transthyrétine. À partir du sérum sanguin, le rétinol est capté par des cellules cibles, telles que les photorécepteurs de la rétine et de l'épithélium.

Lorsque l'organisme reçoit des quantités de vitamine A supérieures à ses besoins (180 à 430 µg de rétinol par jour selon l'âge, le sexe et l'état physiologique), l'excédent se dépose dans le foie, formant un dépôt de cette vitamine. Lorsque l'apport alimentaire en rétinol est réduit, les réserves hépatiques sont libérées dans la circulation sanguine, maintenant la concentration sérique de rétinol à un niveau normal (supérieur à 0,7 µmol/l). D'autres formes biologiquement actives de vitamine A (rétinal et acide rétinoïque) sont présentes dans le sang à de très faibles concentrations (inférieures à 0,35 µmol/l); les esters de rétinol représentent environ 5 % de la vitamine A totale (0,1 à 0,17 µmol/l).

La vitamine A joue un rôle important dans les processus d'oxydoréduction. Le rétinol favorise la formation de glycogène dans le foie et les muscles, contribue à augmenter le taux de cholestérol sanguin et participe à la synthèse des stéroïdes et des hormones sexuelles. Il est nécessaire à la croissance et à la formation du système squelettique, à la resynthèse de la rhodopsine et au fonctionnement normal des muqueuses et de l'épithélium tégumentaire de la peau, prévenant ainsi la métaplasie, l'hyperkératose et la desquamation excessive. La vitamine A contribue au renforcement des cheveux, des dents et des gencives. Ces dernières années, le rôle diversifié de la vitamine A dans la prévention du cancer et la régulation du système immunitaire a été démontré (elle est nécessaire à la phagocytose complète, augmente la synthèse d'Ig, stimule la formation de lymphocytes T tueurs, stimule les lymphocytes T auxiliaires de type II, etc.). La vitamine A est un antioxydant actif, agissant principalement en présence de vitamine E; elle protège la vitamine C de l'oxydation. Une carence en vitamine A est considérée comme un facteur de risque de tumeurs malignes. Des études expérimentales ont montré qu'une augmentation de la teneur en vitamine A dans l'alimentation augmente l'espérance de vie médiane de 17,5 %. Le zinc est un cofacteur essentiel du métabolisme de la vitamine A (nécessaire à la synthèse de la protéine de liaison à la vitamine A).

Les besoins quotidiens moyens en rétinol pour les adultes (20-50 ans) sont de 1,2 mg (4 000 UI, 1 UI équivaut à 0,3 µg de rétinol), de 1,5 mg (5 000 UI) pour les femmes enceintes, de 1,8 mg (6 000 UI) pour les femmes allaitantes et de 2,5 mg (10 000 UI) pour les personnes de plus de 60 ans. Au moins un tiers des besoins quotidiens en rétinol doit être apporté à l'organisme sous forme finie; le reste peut être couvert par la consommation de caroténoïdes, à partir desquels le rétinol est formé. Il convient de noter qu'environ 30 % du rétinol présent dans les aliments est détruit lors du traitement thermique. L'activité du rétinol est deux fois supérieure à celle du carotène; de plus, seulement 30 à 40 % de ce dernier est absorbé par l'intestin. Par conséquent, lors de l’évaluation du régime alimentaire, on estime que 1 mg de rétinol équivaut approximativement à 6 mg de caroténoïdes.

Détermination du rétinol (vitamine A) et des caroténoïdes dans le sérum sanguin selon Bessey tel que modifié par L.A. Anisimova

Principe de la méthode

La détermination de la vitamine A et des caroténoïdes repose sur leur hydrolyse dans une solution alcoolique alcaline suivie d'une extraction avec un mélange de solvants organiques.

Réactifs

• Solution d'hydroxyde de potassium (KOH) 11 M.
• 96% d'alcool éthylique.
• Solution d'hydroxyde de potassium (KOH) 1 M dans de l'alcool éthylique à 96 %: 1 volume de solution de KOH 11 M est mélangé à 10 volumes d'alcool éthylique à 96 %. Le réactif est préparé le jour de l'étude. En cas de coloration lors du mélange, l'alcool doit être purifié par distillation avant utilisation.
• Xylène, chimiquement pur
• Octane, chimiquement pur
• Mélange xylène-octane: préparé en mélangeant des volumes égaux de xylène et d'octane.

Les études sont réalisées à l'aide d'un spectrophotomètre.

Le processus de détermination de la vitamine A

Le sang prélevé au doigt (environ 1 ml) est placé dans un tube à centrifuger, puis placé dans une coupelle en verre contenant de l'eau tiède (température de 40 à 45 °C) pendant 20 à 30 minutes. Pour séparer le sérum, le caillot sanguin est soigneusement aspiré le long des parois du tube à l'aide d'une fine tige de verre, puis centrifugé à 3 000 tr/min pendant 10 minutes.

0,12 ml de sérum est prélevé et transféré dans un tube d'agglutination, où 0,12 ml d'une solution d'hydroxyde de potassium alcoolique 1 M est ensuite ajouté. Le contenu est soigneusement agité.

Les tubes à essai contenant des échantillons sont placés dans un bain-marie pendant 20 minutes à une température de 60° C pour réaliser l'hydrolyse.

Les échantillons sont refroidis, puis additionnés de 0,12 ml d'un mélange xylène-octane, puis agités vigoureusement pendant 10 à 15 secondes. Ils sont ensuite refroidis à nouveau et centrifugés.

La couche supérieure contenant la vitamine A et les caroténoïdes est soigneusement retirée à l'aide d'une pipette Pasteur munie d'une poire en caoutchouc et transférée dans des microcuvettes.

Les échantillons sont spectrophotométrés à une longueur d’onde de 328 nm pour déterminer la vitamine A et à une longueur d’onde de 460 nm pour déterminer les caroténoïdes.

Après la spectrophotométrie, les échantillons sont exposés à un rayonnement ultraviolet pour détruire la vitamine A. A cet effet, une lampe à quartz (bactéricide) est installée à une distance de 15-20 cm des microcuvettes afin que la partie de la cuvette remplie de liquide soit exposée au rayonnement; le temps d'irradiation est de 45-60 min.

Les échantillons sont re-spectrophotométrés à une longueur d'onde de 328 nm. La teneur en vitamine A est déterminée par la différence des valeurs d'extinction (densité optique) en tenant compte du coefficient (facteur) 637 calculé par Bessey pour la vitamine A.

Le calcul est effectué selon la formule:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Où X est la teneur en vitamine A, μg/dl; 637 est le coefficient calculé par Bessey pour déterminer la vitamine A; E328(1) est la densité optique de la solution avant irradiation; E328(2) est la densité optique de la solution après irradiation.

Le coefficient de conversion de la concentration en vitamine A de µg/dL en µmol/L est de 0,035.

La teneur en caroténoïdes est calculée à l'aide de la formule:

X = 480-E480,

Où X est la teneur en caroténoïdes, μg/dl; 480 est le coefficient calculé par Bessey pour déterminer les caroténoïdes; E480 est la densité optique de la solution d'essai.

Note

Selon Bessey, un volume de sérum plus ou moins grand peut être utilisé lors de la recherche, mais son rapport au volume de la solution alcoolique doit être constant avec tout changement du volume (quantité) du mélange xylène-octane.

La teneur normale en vitamine A dans le sérum sanguin est de: 160-270 µg/l chez les nouveau-nés et les nourrissons; 1,05-2,45 µmol/l (300-700 µg/l) chez les adultes. La teneur en caroténoïdes dans le sérum sanguin des adultes est de 800-2 300 µg/l.