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Hybridation in situ
Dernière revue: 04.07.2025
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L'hybridation peut être réalisée non seulement sur gel, sur filtres ou en solution, mais aussi sur des préparations histologiques ou chromosomiques. Cette méthode est appelée hybridation in situ. Une variante de la méthode, utilisant des préparations d'ADN ou d'ARN marquées par des fluorochromes comme sondes, est appelée FISH (hybradisation in situ à la fluorescéine). La sonde d'ADN marquée est appliquée sur des préparations de chromosomes métaphasiques différentiellement colorés et préparés pour l'hybridation (dénaturés). Un traitement préliminaire des chromosomes facilite l'accès de la sonde à l'ADN génomique. Après lavage des molécules d'ADN non liées et application d'une émulsion photosensible (avec un marqueur radioactif), ou traitement approprié (avec des sondes d'ADN marquées à la biotine ou à la fluorescéine), les sites de localisation des séquences d'ADN complémentaires à la sonde d'ADN utilisée peuvent être détectés directement par microscopie sous forme de points caractéristiques au-dessus des sections correspondantes de certains chromosomes.
Cette méthode de recherche permet de déterminer non seulement l’affiliation chromosomique, mais également la localisation intrachromosomique du gène étudié.
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