Analyse du polymorphisme de longueur des fragments de restriction
Dernière revue: 11.04.2020
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La large utilisation de diverses endonucléases de restriction pour l'analyse de l'ADN chromosomique a révélé une grande variabilité dans le génome humain. Même de petits changements dans les régions codantes et régulatrices des gènes structuraux peuvent conduire à la fin de la synthèse d'une certaine protéine ou à la perte de sa fonction dans le corps humain, ce qui affecte habituellement le phénotype du patient. Cependant, environ 90% du génome humain est constitué de séquences non codantes plus variables et contenant de nombreuses mutations dites neutres, ou polymorphismes, et qui n'ont pas d'expression phénotypique. Ces sites polymorphes (locus) sont utilisés dans le diagnostic des maladies héréditaires en tant que marqueurs génétiques. Les loci polymorphes sont présents dans tous les chromosomes et sont liés à une région spécifique du gène. Après avoir déterminé la localisation du locus polymorphique, il est possible d'établir avec quel génome une mutation est associée à la maladie chez le patient.
Pour isoler les régions polymorphes de l'ADN, des enzymes bactériennes sont utilisées - des enzymes de restriction, dont les produits sont des sites de restriction. Les mutations spontanées qui se produisent dans les sites polymorphes les rendent résistantes ou, inversement, sensibles à l'action d'une enzyme de restriction spécifique.
La variabilité mutationnelle dans les sites de restriction peut être détectée en modifiant la longueur des fragments d'ADN restreints, en les séparant en utilisant l'électrophorèse et l'hybridation subséquente avec des sondes d'ADN spécifiques. En l'absence de restriction dans un site polymorphe, un grand fragment sera détecté sur les électrophorégrammes, et s'il est présent, un fragment plus petit sera présent. La présence ou l'absence d'un site de restriction dans les loci identiques de chromosomes homologues permet de marquer de manière fiable le gène mutant et normal et de retracer sa transmission à la descendance. Ainsi, dans l'étude de l'ADN des patients, dans les deux chromosomes dont un site de restriction est présent dans la région polymorphe, de courts fragments d'ADN seront révélés sur l'électrophorégramme. Chez les patients homozygotes pour une mutation qui modifie un site de restriction polymorphe, des fragments de plus grande longueur seront détectés, et dans des fragments hétérozygotes, des fragments courts et longs seront détectés.
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