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Analyse du polymorphisme de longueur des fragments de restriction
Dernière revue: 05.07.2025
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L'utilisation généralisée de diverses endonucléases de restriction pour l'analyse de l'ADN chromosomique a révélé l'énorme variabilité du génome humain. Même de faibles modifications des régions codantes et régulatrices des gènes de structure peuvent entraîner l'arrêt de la synthèse d'une protéine ou la perte de sa fonction dans l'organisme, ce qui affecte généralement le phénotype du patient. Cependant, environ 90 % du génome humain est constitué de séquences non codantes, plus variables, contenant de nombreuses mutations dites neutres, ou polymorphismes, et n'ayant aucune expression phénotypique. Ces régions polymorphes (loci) sont utilisées comme marqueurs génétiques dans le diagnostic des maladies héréditaires. Les locus polymorphes sont présents sur tous les chromosomes et sont liés à une région spécifique du gène. En déterminant la localisation d'un locus polymorphe, il est possible d'établir quel gène est associé à la mutation à l'origine de la maladie chez le patient.
Pour isoler les régions polymorphes de l'ADN, on utilise des enzymes bactériennes, les restrictases, dont les produits sont des sites de restriction. Les mutations spontanées qui se produisent dans les sites polymorphes les rendent résistants ou, au contraire, sensibles à l'action d'une restrictase spécifique.
La variabilité mutationnelle des sites de restriction peut être détectée en modifiant la longueur des fragments de restriction de l'ADN, en les séparant par électrophorèse puis en les hybridant avec des sondes ADN spécifiques. En l'absence de restriction dans un site polymorphe, un seul grand fragment sera détecté sur les électrophorégrammes, et en sa présence, un fragment plus petit sera présent. La présence ou l'absence d'un site de restriction dans des loci identiques de chromosomes homologues permet un marquage relativement fiable du gène mutant et normal, ainsi que le suivi de sa transmission à la descendance. Ainsi, lors de l'étude de l'ADN de patients dont les deux chromosomes présentent un site de restriction dans une région polymorphe, de courts fragments d'ADN seront détectés sur l'électrophorégramme. Chez les patients homozygotes pour une mutation modifiant le site de restriction polymorphe, des fragments plus longs seront détectés, et chez les patients hétérozygotes, des fragments courts et longs.
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