Immunophénotypage des hémoblastoses

Des progrès significatifs dans les études hématologiques associées au cours des dernières années avec l'utilisation des méthodes immunologiques modernes et des outils automatisés pour l'analyse et le tri des cellules de sang périphérique et de moelle osseuse - cytomètre de flux. Morphologique et étude cytochimique traditionnelle de la maladie cellulaire du substrat (sang, moelle osseuse, les ganglions lymphatiques, la rate, etc.), dans de nombreux cas, en particulier dans les maladies lymphoprolifératifs, ne révèlent pas toute la variété d'options parmi les formes semblables morphologiquement et d'identifier l'origine du clone pathologique . Ces problèmes ne peuvent être résolus qu'en étudiant les caractéristiques immunologiques des cellules. Chaque étape de la différenciation des cellules hématopoïétiques correspond à son propre ensemble d'antigènes, qui selon la classification internationale sont appelés différenciation et sont divisés en groupes de différenciation, notés CD.

A la différenciation des blocs de modifications néoplasiques peut se produire à tout stade du développement normal des cellules, résultant en un clone de cellule pathologique définissant la maladie de substrat et ayant la même immunologique (ou phénotypique) caractéristique. Après une étude de ces marqueurs dans les cellules peut être déterminé par toute forme ou mode de réalisation de la maladie sont compatibles, à savoir sur la base du diagnostic différentiel de phénotype cellulaire immunologique, ce qui est le plus difficile dans les troubles lymphoprolifératifs, parce que les principales maladies pathologiques de substrat cellulaire sont presque le même type de cellules morphologiquement.

Le phénotypage permet le typage des cellules sanguines de la série myélo-, mono- et lymphocytaire à l'aide d'anticorps monoclonaux par la présence d'antigènes de différenciation (récepteurs) dans la paroi cellulaire. Dans la section «Évaluation du statut immunitaire de l'organisme», les caractéristiques et la signification diagnostique des marqueurs cellulaires sont partiellement décrites; Voici une brève description des marqueurs cellulaires antigéniques appliqués au diagnostic de l'hémoblastose. Sur les membranes des cellules sanguines et de la moelle osseuse rouge, les antigènes suivants (marqueurs) peuvent être identifiés.

• CD2 est une glycoprotéine transmembranaire monomère. Il est présent à la surface de tous les lymphocytes T circulants et de certains lymphocytes NK. Le CD2 participe au processus d'activation alternative des lymphocytes T. La détection de CD2 en utilisant des anticorps monoclonaux dans la pratique clinique est utilisée pour le phénotypage des leucémies à cellules T aiguës, des lymphomes, des états inflammatoires chroniques et immunodéficients.
• CD3 - un complexe protéique associé à un récepteur de lymphocytes T spécifique de l'antigène, est le marqueur fonctionnel principal des lymphocytes T. Il facilite le transfert du signal d'activation de la membrane vers le cytoplasme de la cellule. La détection de CD3 est indiquée pour le diagnostic de la leucémie aiguë à lymphocytes T, du lymphome (CD3 n'est pas exprimé dans les tumeurs lymphoïdes non-T) et des maladies d'immunodéficience.
• Le CD4 est une glycoprotéine transmembranaire exprimée par une sous-population de T-helpers (inducteurs) constituant 45% des lymphocytes du sang périphérique. Dans les premiers stades du développement lymphocytaire dans le thymus, les antigènes CD4, ainsi que CD8, sont exprimés par tous les lymphocytes corticaux. Les thymocytes médullaires, dont le phénotype est similaire aux cellules T CD4 + matures du sang périphérique (T-helpers), expriment déjà les récepteurs CD4 ou CD8. Dans le sang périphérique, jusqu'à 5% des cellules sont marquées simultanément CD4 et CD8. Une légère expression de CD4 est possible sur certaines cellules monocytes. CD4 est exprimé dans la plupart des cas, le lymphome des lymphocytes T, y compris mycose fongoïde, et dans la leucémie des lymphocytes T associée HTLV (HTLV - virus T-lymphotrope humain - virus T-lymphotrope humain).
• CD5 - une glycoprotéine monocaténaire, présente sur tous les lymphocytes T matures et la plupart des thymocytes, est faiblement exprimée par les lymphocytes B. Le CD5 est détecté sur les cellules néoplasiques de la leucémie lymphocytaire chronique à lymphocytes B et du lymphome centrocinétique. Dans d'autres types de maladies lymphoïdes malignes - lymphome folliculaire, leucémie à tricholeucocytes, lymphome à grandes cellules - CD5 n'est pas exprimé.
• CD7 est une protéine monocaténaire, le marqueur le plus précoce de la différenciation des lymphocytes T. Il est exprimé par les lymphocytes pro-T avant même qu'ils migrent vers le thymus. CD7 est détecté sur la plupart des cellules NK, une faible expression est notée sur les monocytes. Les lymphocytes B et les granulocytes ne contiennent pas cet antigène. La définition de CD7 est utilisée pour le diagnostic des lymphomes, la leucémie lymphoblastique à cellules T chez l'enfant.
• CD8 est une protéine constituée de deux chaînes polypeptidiques reliées par des ponts disulfure. Elle est exprimée par une sous-population de lymphocytes T cytotoxiques et suppresseurs, qui comprennent 20 à 35% de lymphocytes du sang périphérique. Cet antigène contient également des lymphocytes NK, des thymocytes corticaux, 30% des thymocytes médullaires et une sous-population de cellules de moelle osseuse rouge. Le CD8 est examiné pour l'évaluation quantitative de la teneur en suppresseur de T (voir la section "Suppresseurs de lymphocytes T dans le sang" ci-dessus).

• CD10 est l'endopeptidase associée à la membrane cellulaire. CD10 exprime de jeunes formes de lymphocytes B et une sous-population de lymphocytes corticaux. CD10 exprime toutes les cellules de ALL.
• CD11c exprime des macrophages, des monocytes, des granulocytes, des cellules NK et des cellules leucémiques à cellules velues sur la membrane cellulaire.
• CD13 est une glycoprotéine exprimée par des cellules myélomonocytaires (cellules progénitrices, neutrophiles, basophiles, éosinophiles, monocytes et cellules leucémiques myéloïdes). Il est absent des lymphocytes T et B, des érythrocytes et des plaquettes.
• CD14 est une glycoprotéine membranaire de surface. Il est exprimé principalement par les monocytes et les macrophages. CD14 est détecté dans plus de 95% des monocytes du sang périphérique et de la moelle osseuse. Une forte expression de CD14 est observée dans la leucémie myéloblastique aiguë. Dans la leucémie lymphoblastique aiguë et chronique, cet antigène n'est pas exprimé.
• CD15 est un oligosaccharide. Il participe aux processus de phagocytose et de chimiotaxie. Cet antigène est présent à la surface des granulocytes matures et des cellules de Berezovsky-Sternberg. L'expression de l'antigène CD15 est détectée dans la maladie de Hodgkin. Dans les lymphomes non hodgkiniens, le CD15 n'est pas détecté dans la plupart des cas.
• Le CD16 est exprimé à la surface des granulocytes, des monocytes, des macrophages et des cellules NK. Tous les lymphocytes exprimant cet antigène ont la capacité de cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps. CD16 est déterminée lors de la typage des leucémies myélocytaires chroniques, pour caractériser les cellules NK.
• CD19 est une glycoprotéine présente sur tous les lymphocytes B périphériques, ainsi que sur tous les précurseurs des cellules B. Il est absent sur les cellules plasmatiques. C'est le premier marqueur des cellules B, joue un rôle important dans la régulation de l'activation et de la prolifération des lymphocytes B. CD19 est exprimé sur toutes les cellules néoplasiques de leucémie aiguë d'origine B, et est également présent dans certaines formes de leucémie aiguë monoblaste.
• CD20 est une protéine non glycosylée. Dans l'ontogenèse des lymphocytes B, l'antigène CD20 apparaît après CD19 au stade de la différenciation pré-B des lymphocytes. Il est absent sur la membrane plasmique des plasmocytes. Il est exprimé dans ALL, leucémie lymphoïde chronique à cellules B, leucémie à tricholeucocytes, lymphome de Burkitt et très rarement dans la leucémie monoblastique aiguë.
• CD21 est une glycoprotéine, en quantité significative est présente sur les lymphocytes B dans les organes lymphoïdes et dans une petite quantité sur les lymphocytes B du sang périphérique. CD21 est un récepteur du virus d'Epstein-Barr.
• CD22 est une protéine constituée de deux chaînes polypeptidiques. Il est exprimé sur la membrane de la plupart des lymphocytes B, y compris les cellules progénitrices (prolymphocytes). L'antigène n'est pas exprimé sur les lymphocytes B (plasmocytes) après leur activation. L'expression la plus prononcée de CD22 est détectée sur les cellules avec la leucémie à tricholeucocytes, faible dans les leucémies myéloïdes et LAL non à cellules T.
• CD23 est une glycoprotéine exprimée par des lymphocytes B activés du sang périphérique dans une mesure beaucoup plus grande. CD23 médie la cytotoxicité IgE-dépendante et la phagocytose par les macrophages et les éosinophiles.
• CD25 est une glycoprotéine monocaténaire identifiée comme récepteur de faible affinité pour l'IL-2. Ce récepteur est exprimé sur les lymphocytes T activés et, à plus faible densité, sur les lymphocytes B activés. Dans le sang périphérique de personnes en bonne santé, l'antigène est présent dans plus de 5% des cellules lymphoïdes.
• CD29 est un récepteur de la fibronectine. Il est largement distribué dans les tissus, il est exprimé par les leucocytes. La détection du CD29 sur les cellules du sang périphérique est utilisée pour caractériser une sous-population de lymphocytes T ayant le phénotype CD4 + CD29 +, qui sont appelés auxiliaires de type 2 (Th2). Ces cellules, à travers la production de lymphokines, participent à la réalisation de la réponse immunitaire humorale.
• CD33 est une glycoprotéine transmembranaire. Il est présent à la surface des cellules de la série myéloïde et monocytaire. On le trouve à la surface des monocytes et, dans une moindre mesure, des granulocytes du sang périphérique. Environ 30% des cellules de la moelle osseuse rouge expriment le CD33, y compris les myéloblastes, les promyélocytes et les myélocytes. L'antigène est absent sur les membranes des cellules souches pluripotentes. CD33 est utilisé pour caractériser les cellules dans les leucémies myéloïdes. Les cellules leucémiques d'origine lymphoïde et érythroïde n'expriment pas CD33.
• CD34 est une phosphoglycoprotéine, exprimée par des cellules progénitrices hématopoïétiques, y compris des cellules souches monopotentes. L'expression la plus prononcée de Ar est observée chez les progéniteurs précoces; lorsque les cellules mûrissent, l'expression du marqueur tombe. CD34 est également trouvé sur les cellules endothéliales. CD34 est utilisé pour caractériser les cellules dans la leucémie aiguë myéloïde et lymphoblastique. Avec la leucémie lymphocytaire chronique et les lymphomes, l'expression de l'antigène CD34 n'est pas détectée.

• CD41a est exprimé par les plaquettes et les mégacaryocytes. Les anticorps monoclonaux pour la détection de CD41a sont utilisés pour diagnostiquer la leucémie mégacaryoblastique. Avec la thrombasthénie de Glązmann, l'expression de cet antigène est absente ou significativement supprimée.
• CD42b est une glycoprotéine membranaire constituée de deux chaînes polypeptidiques. Le marqueur se trouve à la surface des plaquettes et des mégacaryocytes. En pratique clinique, la détection de CD42b est utilisée pour diagnostiquer la thrombocytopathie - syndrome de Bernard-Soulier.
• CD45RA appartient à la classe des glycoprotéines transmembranaires. C'est un antigène leucocytaire commun. Il est exprimé sur la membrane cellulaire des lymphocytes B, dans une moindre mesure sur les lymphocytes T et sur les thymocytes médullaires matures. Le marqueur n'est pas exprimé par les granulocytes.
• CD45RO est une isoforme de faible poids moléculaire de CD45RA - un leu leucocyte commun. On les trouve sur les lymphocytes T (lymphocytes T à mémoire), les sous-populations de lymphocytes B, les monocytes et les macrophages. Les anticorps monoclonaux contre CD45RO interagissent avec la plupart des thymocytes, une sous-population de lymphocytes T CD4 + et CD8 + au repos et de cellules T activées matures. Les cellules d'origine myélomonocytaire, les granulocytes et les monocytes portent également cet antigène. Il est détecté dans les lymphomes centroblastiques et immunoblastiques.
• CD46 - dimère O-glycosylé. Il est largement distribuée dans les tissus et exprimée en T et les lymphocytes B, les monocytes, les granulocytes, les cellules NK, les plaquettes, les cellules endotheliales, les fibroblastes, mais est absent sur la surface des erythrocytes. CD46 assure la protection des tissus contre l'action du complément.
• CD61 est un antigène plaquettaire. Il est exprimé sur les plaquettes du sang périphérique et de la moelle osseuse rouge, ainsi que sur les mégacaryocytes et les mégacaryoblastes. Sa définition est utilisée comme marqueur de la leucémie aiguë mégacaryoblastique. L'expression de l'antigène est absente ou supprimée chez les patients atteints de thrombasténie de Glanzmann.
• CD95, également appelé Fas ou APO-1, est une glycoprotéine transmembranaire, un membre de la famille des récepteurs du facteur de nécrose tumorale. Il est exprimé en quantités significatives sur les lymphocytes T du sang périphérique (CD4 + et CD8 +) et, dans une moindre mesure, sur les lymphocytes B et les cellules NK. Cet antigène est également exprimé sur les granulocytes, les monocytes, les cellules tissulaires et les cellules néoplasiques. La liaison de CD95 au ligand Fas (CD95L) induit une apoptose dans les cellules.
• CD95L, ou Fas ligand, une protéine membranaire appartenant à la famille des récepteurs du facteur de nécrose tumorale. Cet antigène est exprimé par les lymphocytes T cytotoxiques, les cellules NK et très souvent par les cellules tumorales; l'inducteur principal de l'apoptose dans les cellules.
• HLA-DR est un déterminant monomorphe des molécules de classe II du principal complexe d'histocompatibilité humaine (HLA). Le marqueur est exprimé sur les cellules de Langerhans, les cellules dendritiques des organes lymphoïdes, certains types de macrophages, les lymphocytes B, les lymphocytes T activés et les cellules épithéliales du thymus. Le test de ce marqueur est utilisé pour quantifier les lymphocytes T activés avec le phénotype CD3 + HLA-DR +.

En utilisant une sélection différente d'anticorps monoclonaux dirigés contre les marqueurs, il est possible de faire un portrait phénotypique des cellules caractéristiques d'une forme donnée de leucémie.

Outre l'utilisation des techniques d'immunophénotypage pour le diagnostic de diagnostic différentiel et des hémopathies malignes, tourné particulièrement l'importance de leur utilisation dans le processus de traitement pour évaluer l'état de rémission et la population résiduelle de cellules leucémiques. Connaissant le « portrait » phénotypiques des cellules blastiques dans la période de diagnostic, à ces marqueurs, il peut trouver clone leucémique de cellules en rémission, et de l'augmentation de leur nombre - de prédire le développement de la rechute à long (pour 1-4 mois) jusqu'à ce que ses traits cliniques et morphologiques.

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