Diagnostic de l'herpès

Le diagnostic de l'herpès est basé sur la conduite de l'excrétion virale classique dans des cultures cellulaires sensibles, immunofluorescence et méthodes sérologiques, la réalisation d'études colposcopie en utilisant des méthodes moléculaires biologiques modernes (PCR, point-hybridation), qui vous permet de diagnostiquer tout le groupe herpèsvirus, y compris HHV-6 et HHV-7 types.

Méthodes de diagnostic en laboratoire de l'infection herpétique

Les principales méthodes visant à sécréter le VHS ou à détecter des particules virales et / ou leurs composants	Méthodes auxiliaires visant à détecter les anticorps anti-HSV dans les fluides biologiques du corps humain
Isolement du VHS dans les cultures sensibles de cellules et d'animaux Microscopie électronique directe et immunisée Options AMF directes et indirectes IFA Méthodes biologiques moléculaires Réaction d'agglutination au latex	Réaction de neutralisation RSK Détermination des anticorps dirigés contre les protéines non structurales du HSV-1,2

Il est montré que 76% des patients ont l'herpès génital (GH) causé par HSV-2, et dans 24% - type HSV-1. Et GG en tant que monoinfection s'est produite chez 22% des patients, dans 78% des cas, des associations microbiennes ont été détectées. Chez 46% des patients, une parasitocénose causée par deux agents pathogènes a été détectée, dont une détection de chlamydia dans 40% des cas. Moins souvent dans les frottis déterminés gardnerelly, Trichomonas, gonocoques.

Chez 27% des patients, la parasitocénose était représentée par trois et 5,2% par quatre pathogènes. Et plus souvent, il y avait une combinaison de chlamydia avec Gardnerella et Candida fungi. Ces données justifient la nécessité d'un examen bactériologique complet des patients AA pour identifier les combinaisons d'agents pathogènes, ainsi que l'étude approfondie de la pathogenèse des infections mixtes du tractus urogénital, ce qui permettrait un traitement complexe différencié de l'infection par le HSV.

Matériaux à étudier dans l'isolement du HSV en fonction de la localisation des lésions herpétiques

Localisation des lésions	Contenu des vésicules	Grattage cellulaire				SDC	Aspirer des bronches	Bioptat	Sang
		1	2	3	4
Cuir	+								+
Yeux			+						+
Genitalia				+					+
Anus	+				+				+
Bouche	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Léger		+					+		+
Le foie								+	+
Herpès congénital	+	+	+				+		+

Méthodes de diagnostic en laboratoire de l'infection par le cytomégalovirus

Méthodes	Temps requis pour obtenir des résultats	Notes
VIRUSOLOGIQUE
Microscopie électronique	3 heures	Battant
Isolement du virus en culture cellulaire (CPD)	4-20 jours	Standard, lent
Coloration immunofluorescente de l'AH précoce avec des anticorps monoclonaux	6 heures	Moins spécifique
CYTOLOGICAL	2-3 heures	Moins spécifique
SEOLOGICAL
RSK	2 jours	Standart
Ssubsistence	1 jour	Laborieux
REEF	6 heures	Simple, spécifique
NFIF	6 heures	Compliqué
RIMF	6 heures	Compliqué
IFA (IgM, TO)	6 heures	Rapide, simple
Immunoblot	6 heures	Cher
MOLECULAIRE-BIOLOGIQUE
MG	5-7 jours	Coûteux, long
PCR	3 heures	Cher

Méthodes de diagnostic du virus de l'herpès zoster

Méthodes de diagnostic	Techniques de laboratoire
INDIRECT
Allocation	Culture de tissus, embryons de poulet, animaux de laboratoire, co-culture avec des cellules permissives ou des virus auxiliaires
Identification des isolats	Réaction de neutralisation, DSC, IF, IPPE, réaction des isolats de précipité, agglutination, IF
DIRECT
Cytologie	Frottis: immunofluorescence des couleurs
Histologie	Pathomorphologie de la cellule
Structure	Microscopie embryonnaire, microscopie immuno-électronique
Détermination des antigènes	IF, PIÉF, RIM, IFA
Détermination de la production locale d'anticorps	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Approches biologiques moléculaires	Hybridation moléculaire, PCR

Diagnostic en laboratoire de l'infection causée par le virus de l'herpès zoster

Problèmes de diagnostic	Méthodes	Résultats attendus
Infection primaire aiguë	1	Détection après 2 heures
	2	Le taux d'anticorps augmente lentement
	3	Présence 3 jours après l'infection
Infection réactivée aiguë	1	Détection de l'ULV en 2 heures
	2	Le taux d'anticorps augmente lentement
	4	Présente 4 jours après l'apparition d'éruptions cutanées

1. la détermination dans le fluide des vésicules de WIEF;
2. sérologie: DSC, ELISA, visant à identifier
3. Sérologie: ELISA, visant à détecter les IgM;
4. sérologie: ELISA, visant à détecter IgA, IgM.

Méthodes pour indiquer la réponse immunitaire d'une infection due au virus de l'herpès zoster

Approche	Méthode
Détection d'un titre d'anticorps accru dans le second sérum	RSK, RTGA, RPGA, réaction de neutralisation IF, RIM, ELISA
Détection des anticorps IgG, Ig A spécifiques à la classe dans le premier échantillon de sérum	IFA, IF, RIM, agglutination au latex

Interprétation des résultats de l'examen sérologique des sérums de patients sur les infections à herpèsvirus (ELISA)

Nom de l' infection / marqueur	Les seuils moyens pour les infections
	Résultats de l'analyse	Interprétation
Cytomégalie Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) IgM anti-CMV (100-300%)	Positif 1-6 Positif 6-10 Positif> 10 Négatif Positif 100-300 Négatif <90 Douteux 90-100	Rémission Aggravation de la maladie Phase aiguë de la maladie Aucune infection (maladie) Phase aiguë de la maladie Répéter l'analyse après 2-3 semaines
Herpès simple 1,2 sérotypes Anti-HSV 1/2 total. (100-900%)	Positif 100-400 Positif 400-800 Positif> 800 Négatif <100	Remission Aggravation de la maladie Phase aiguë de la maladie Aucune infection (maladie)

Le tableau présente les principales méthodes de diagnostic en laboratoire des infections à herpèsvirus, ainsi que les matériaux biologiques recommandés pour l'isolement du VHS, en tenant compte de la localisation des lésions herpétiques.

Fiable est l'attribution de l'herpès simplex et CMV à travers l'infection de cultures cellulaires sensibles. Ainsi, dans l'examen virologique de 26 patients pendant la période de rechute, le VHS a été isolé sur une culture de cellules Vero sensibles dans 23 cas (88,4%). Dans les cultures infectées, on observe un schéma d'action cytopathique caractéristique du HSV: la formation de cellules géantes multinucléées ou l'accumulation de cellules arrondies et élargies sous forme de grappes. Dans 52,1% des cas, il a été possible de détecter les foyers de l'effet cytopathogène du virus 16 à 24 heures après l'infection. En 48-72 heures d'incubation des cultures infectées, le pourcentage de matériaux provoquant une destruction cellulaire spécifique a augmenté à 87%. Et seulement dans 13% des cas, des résultats positifs ont été détectés 96 heures après l'infection et plus ou avec des passages répétés.

Méthodes de diagnostic en laboratoire de l'infection herpétique généralisée

Les principales méthodes visant à la détection (isolement) des herpèsvirus, de leurs particules et de leurs composants

Méthodes auxiliaires visant à détecter les anticorps dirigés contre les virus de l'herpès dans les liquides biologiques, détectant les changements enzymatiques dans le sérum sanguin

Isolement du virus de l' herpès sur les cultures de cellules sensibles et animale microscopie électronique directe et immunitaire méthode à l'immunoperoxydase directe et indirecte modes de réalisation directs et les options indirectes technique d'anticorps fluorescent d' options ELISA modes de réalisation de moléculaire (ADN-ADN) hybridant Polymerase Chain Reaction agglutination au latex de réaction

Neutralisation réaction complément fixation agglutination au latex de réaction méthode d'immunofluorescence indirecte mode de réalisation indirecte variante de la méthode à l'immunoperoxydase modes de réalisation ELISA Méthode immunitaire buvard fixation radiale du complément Méthode Détermination des niveaux d'alanine et d' aspartate

Pour diagnostiquer la mononucléose infectieuse (infection causée par VEB), des méthodes sérologiques sont utilisées. La réaction de Paul Bunnel avec des érythrocytes d'un bélier, un titre diagnostique de 1:28 et plus avec une seule étude du sérum, ou une augmentation de 4 fois des anticorps dans l'examen des sérums appariés. Utilisez la réaction de Goff-Bauer avec une suspension de 4% de globules rouges formalisés du cheval. Le résultat est pris en compte après 2 minutes, avec une mononucléose infectieuse, la réaction est hautement spécifique.

Actuellement, un test immuno-enzymatique (ELISA) est en cours de développement pour diagnostiquer la mononucléose infectieuse. Dans ce cas, les anticorps IgG et IgM dans le sérum du patient sont déterminés en l'incubant avec des lymphoblastes infectés par EBV, suivi par un traitement avec des anticorps fluorescents. Dans la période aiguë de la maladie, les anticorps dirigés contre l'antigène de la capside virale sont déterminés dans un titre de 1: 160 et plus.

Lorsque vous utilisez un certain nombre de systèmes de test commerciaux importés dans IFA peut identifier: des anticorps dirigés contre les fourmis anticorps enveloppe VEB Egan à l'antigène précoce de VEB, l'anticorps global à un antigène précoce de VEB, déterminé dans la phase aiguë de la maladie et dans le noyau et dans le cytoplasme, et l'anticorps limité tôt EBV, déterminé dans la phase aiguë de la maladie et dans le noyau et dans le cytoplasme des cellules, délimité des anticorps dirigés contre l'antigène précoce EBV, déterminé au milieu de la maladie uniquement dans le cytoplasme des cellules et des anticorps dirigés contre l'antigène nucléaire EBV. L'utilisation de ces systèmes de test permet un diagnostic différentiel d'un certain nombre de maladies associées à l'EBV.

Après ELISA positif pour identifier les anticorps EBV donner une réponse de confirmation d'immunotransfert, qui détectent la présence d'anticorps pour séparer les protéines marqueurs EBV (p-protéines): P23, P54, P72 (la présence de la protéine suggère la possibilité de reproduction EBV), p 138. Ledit Au-dessus des méthodes de laboratoire sont utilisés pour contrôler l'efficacité du traitement.

La sensibilité des méthodes virologiques est de 85-100%, la spécificité est de 100%, le temps d'étude est de 2-5 jours. Souvent en pratique, la méthode d'immunofluorescence directe (PIF) avec des anticorps polyclonaux ou monoclonaux contre HSV-1 et HSV-2 est utilisée. La méthode UIF peut être facilement reproduite dans un laboratoire clinique conventionnel, elle n'est pas coûteuse, la sensibilité est supérieure à 80%, la spécificité est de 90-95%. La microscopie par immunofluorescence a révélé la présence d'inclusions cytoplasmiques, les caractéristiques morphologiques, le pourcentage de cellules infectées dans les frottis frottis de l'urètre, du canal cervical, du col de l'utérus, du rectum.

La méthode UIF donne une idée des propriétés morphologiques des cellules et des changements dans la localisation des antigènes HSV. En plus des signes directs de lésions cellulaires par les virus de l'herpès (détection de luminescence spécifique), il existe des signes indirects d'infection herpétique selon les données de l'UIF:

• agrégation de la matière nucléaire, exfoliation de karyoolma;
• présence du soi-disant. Des "trous" de noyaux, lorsqu'un seul caryotype reste du noyau de la cellule;
• la présence d'inclusions intranucléaires - veau de Caudry.

Lors de la définition du médecin UIF reçoit non seulement la qualité, mais aussi une évaluation quantitative des cellules infectées que nous avons utilisés pour évaluer l'efficacité du traitement antiviral avec acyclovir (AC). Ainsi, 80 patients atteints d'herpès génital simple (GG) ont été examinés par la méthode UIF en dynamique. On montre que si, avant le traitement par acyclovir dans les frottis 88% des patients avaient un pourcentage élevé de cellules infectées (50-75% et plus), après un cours de l'acyclovir dans les frottis 44% des patients avec des cellules en bonne santé détectés dans 31% des cas sont marqués cellules infectées individuelles et 25% des patients avaient jusqu'à 10% de cellules infectées.

Le contenu des cellules infectées dans les frottis (réaction PIF) des patients atteints d'herpès génital, traités avec l'acyclovir

Périodes de maladie	Pourcentage dans les frottis
	Cellules infectées					cellules normales
	Plus de 75%	50-75%	40-50%	10%	Cellules individuelles en n / sp
Rechute (avant le traitement)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Rémission (après traitement)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

En utilisant de nombreuses années d'UIF et la méthode d'hybridation par points, presque 100% des cas ont coïncidé avec les résultats de l'étude. Il convient de noter que, afin d'accroître la fiabilité du diagnostic de la GH, en particulier dans les cas où il y a infraclinique et les formes malomanifestnyh de l'herpès, il est recommandé d'utiliser la méthode 2-3 du diagnostic de laboratoire, en particulier lors de l'examen des femmes enceintes, des femmes avec antécédents obstétricaux défavorisés, les personnes ayant un diagnostic gynécologique non précisé.

Ainsi, lorsque le diagnostic par PCR des infections virales-bactériennes du tractus urogénital, il est nécessaire d'évaluer les résultats positifs obtenus en tenant compte de l'anamnèse, la présence (ou l'absence) de symptômes cliniques spécifiques de la maladie. Si la chlamydia est détectée avec la PCR, alors dans ce cas il est possible de parler de l'infection et de résoudre les problèmes de la thérapeutique en conséquence. Dans le cas de la détection de mycoplasmes (ureaplasmas), qui sont des microorganismes opportunistes, des études de culture supplémentaires sont nécessaires pour confirmer le diagnostic, c'est-à-dire le semis du matériel du patient à des cultures cellulaires sensibles. Ce n'est que lorsque des résultats positifs sont obtenus dans l'analyse de culture que l'on peut parler de confirmation en laboratoire du diagnostic de mycoplasmose. La même méthode permettra, si nécessaire, de déterminer la sensibilité des mycoplasmes isolés aux formes médicinales fréquemment utilisées (antibiotiques, fluoroquinolones, etc.).

Peut-être une infection à un stade avec plusieurs virus de la famille Nepresviridae. Souvent, nous avons détecté l'infection d'un patient avec les virus HSV-1, HSV-2 et CMV. Beaucoup plus souvent infectés par plusieurs virus de l'herpès étaient des patients avec des manifestations cliniques et de laboratoire de l'IDS secondaire (patients avec oncohematological, oncological, HIV-infected). Ainsi, il est montré que les troubles cliniques et immunologiques évoluant avec l'infection par le VIH s'accompagnent d'une augmentation du nombre de virus de l'herpès détectés par hybridation moléculaire. Dans ce pronostic le plus important peut être considéré comme une détection complexe en une étape de l'ADN de type HSV-1, CMV et HHV-6.

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