Cellules souches hématopoïétiques

Les cellules souches hématopoïétiques (CSH), comme les cellules progénitrices mésenchymateuses, sont caractérisées par leur multipotence et donnent naissance à des lignées cellulaires dont les éléments finaux forment les éléments figurés du sang, ainsi qu'à un certain nombre de cellules tissulaires spécialisées du système immunitaire.

L'hypothèse de l'existence d'un précurseur commun à toutes les cellules sanguines, ainsi que le terme même de « cellule souche », appartiennent à A. Maksimov (1909). Le potentiel de formation de masse cellulaire dans les CSH est énorme: les cellules souches de la moelle osseuse produisent quotidiennement 10 cellules qui constituent les éléments figurés du sang périphérique. L'existence même de cellules souches hématopoïétiques a été établie en 1961 lors d'expériences de restauration de l'hématopoïèse chez des souris ayant reçu une dose létale d'irradiation radioactive détruisant les cellules souches de la moelle osseuse. Après transplantation de cellules de moelle osseuse syngéniques à ces animaux létalement irradiés, des foyers distincts d'hématopoïèse ont été découverts dans la rate des receveurs, provenant de cellules précurseurs clonogéniques uniques.

La capacité des cellules souches hématopoïétiques à s'auto-entretenir, assurant ainsi la fonction hématopoïétique au cours de l'ontogenèse, a été démontrée. Au cours du développement embryonnaire, les CSH se distinguent par une forte activité migratoire, nécessaire à leur déplacement vers les zones de formation des organes hématopoïétiques. Cette propriété des CSH est également préservée au cours de l'ontogenèse: grâce à leur migration constante, le pool de cellules immunocompétentes se renouvelle en permanence. La capacité des CSH à migrer, à franchir les barrières histohématiques, à s'implanter dans les tissus et à croître clonogéniquement a servi de base à la transplantation de cellules de moelle osseuse dans un certain nombre de maladies associées à une pathologie du système hématopoïétique.

Comme toutes les cellules souches, les cellules souches hématopoïétiques sont présentes dans leur niche (moelle osseuse) en très petites quantités, ce qui rend leur isolement difficile. D'un point de vue immunophénotypique, les CSH humaines sont caractérisées comme des cellules NK CD34+ capables de migrer dans la circulation sanguine et de peupler les organes du système immunitaire ou de repeupler le stroma de la moelle osseuse. Il est important de comprendre que les CSH ne sont pas les cellules les plus immatures de la moelle osseuse, mais proviennent de précurseurs, notamment de cellules CD34-négatives dormantes de type fibroblaste. Il a été établi que les cellules présentant le phénotype CD34 sont capables de pénétrer dans la circulation sanguine, où elles changent de phénotype en CD34+. Cependant, lors de leur migration inverse dans la moelle osseuse, sous l'influence du microenvironnement, elles redeviennent des cellules souches CD34-négatives. À l'état de repos, les cellules CD34~ ne répondent pas aux signaux de régulation paracrine du stroma (facteurs de croissance, cytokines). Cependant, dans les situations nécessitant une intensité accrue de l'hématopoïèse, les cellules souches de phénotype CD34 répondent aux signaux de différenciation en formant des cellules progénitrices hématopoïétiques et mésenchymateuses. L'hématopoïèse se produit par contact direct des CSH avec les éléments cellulaires du stroma de la moelle osseuse, représenté par un réseau complexe de macrophages, de cellules endothéliales réticulaires, d'ostéoblastes, de fibroblastes stromaux et de matrice extracellulaire. La base stromale de la moelle osseuse n'est pas seulement une matrice ou un « squelette » pour le tissu hématopoïétique; elle assure une régulation fine de l'hématopoïèse grâce aux signaux régulateurs paracrines des facteurs de croissance, des cytokines et des chimiokines, et assure également les interactions adhésives nécessaires à la formation des cellules sanguines.

Ainsi, le système d'hématopoïèse, en renouvellement constant, repose sur une cellule souche hématopoïétique polypotente (du point de vue de l'hématopoïèse) capable d'auto-entretien à long terme. Au cours du processus d'engagement, les CSH subissent une différenciation primaire et forment des clones de cellules présentant des caractéristiques cytomorphologiques et immunophénotypiques différentes. La formation séquentielle de cellules progénitrices primitives et engagées aboutit à la formation de cellules progénitrices morphologiquement identifiables de différentes lignées hématopoïétiques. Les étapes suivantes de ce processus complexe et multi-étapes de l'hématopoïèse aboutissent à la maturation des cellules et à la libération d'éléments figurés matures dans le sang périphérique: érythrocytes, leucocytes, lymphocytes et thrombocytes.

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Sources de cellules souches hématopoïétiques

Les cellules souches hématopoïétiques sont considérées comme la source de cellules souches la plus étudiée, en grande partie grâce à leur utilisation clinique en transplantation de moelle osseuse. À première vue, on en sait beaucoup sur ces cellules. C'est en partie vrai, car les cellules souches hématopoïétiques (CSH) sont les éléments cellulaires les plus accessibles. Chacun d'entre eux (érythrocytes, leucocytes, lymphocytes, monocytes/macrophages et plaquettes) a été soigneusement étudié à tous les niveaux: de la microscopie optique à la microscopie électronique, des caractéristiques biochimiques et immunophénotypiques à l'identification par PCR. Cependant, le suivi des paramètres morphologiques, ultrastructuraux, biochimiques, immunophénotypiques, biophysiques et génomiques des CSH n'a pas apporté de réponses à de nombreuses questions problématiques, dont la résolution est nécessaire au développement de la transplantation cellulaire. Les mécanismes de stabilisation des cellules souches hématopoïétiques à l'état dormant, leur activation, leur entrée dans la phase de division symétrique ou asymétrique et, surtout, leur engagement dans la formation d'éléments fonctionnels différents du sang tels que les érythrocytes, les leucocytes, les lymphocytes et les plaquettes n'ont pas encore été établis.

La présence dans la moelle osseuse de cellules présentant le phénotype CD34, progénitrices des cellules souches mésenchymateuses et hématopoïétiques, a soulevé la question de l'existence des précurseurs les plus précoces de la différenciation cellulaire en lignées stromales et hématopoïétiques, proches des cellules CD34-négatives. La cellule dite « cellule initiatrice de culture à long terme » (LTC-IC) a été obtenue grâce à la méthode de culture à long terme. La durée de vie de ces cellules précurseurs à activité de formation de colonies sur la base stromale de la moelle osseuse avec une certaine combinaison de facteurs de croissance dépasse 5 semaines, tandis que la viabilité des unités formatrices de colonies engagées (UFC) en culture n'est que de 3 semaines. Actuellement, les LTC-IC sont considérées comme un analogue fonctionnel des CSH, car avec un potentiel de repopulation élevé, environ 20 % des LTC-IC sont caractérisées par le phénotype CD34+CD38- et présentent une forte capacité d'auto-renouvellement. Ces cellules sont présentes dans la moelle osseuse humaine à une fréquence de 1:50 000. Cependant, les cellules initiatrices myéloïdes-lymphoïdes, obtenues dans des conditions de culture à long terme (15 semaines), sont considérées comme les plus proches des CSH. Ces cellules, appelées LTC, font partie des cellules de la moelle osseuse cérébrale humaine, dix fois moins fréquentes que les LTC-IC et forment des lignées cellulaires de lignées hématopoïétiques myéloïdes et lymphoïdes.

Bien que le marquage des cellules souches hématopoïétiques par des anticorps monoclonaux suivi d'une identification immunophénotypique soit la principale méthode de reconnaissance et de tri sélectif des cellules souches hématopoïétiques, l'application clinique des CSH ainsi isolées est limitée. Le blocage du récepteur CD34 ou d'autres antigènes marqueurs par des anticorps lors du tri immunopositif modifie inévitablement les propriétés des cellules ainsi isolées. L'isolement immunonégatif des CSH sur colonnes magnétiques est considéré comme préférable. Cependant, dans ce cas, des anticorps monoclonaux fixés sur un support métallique sont généralement utilisés pour le tri. De plus, et c'est un point important, les deux méthodes d'isolement des CSH reposent sur des caractéristiques phénotypiques plutôt que fonctionnelles. Par conséquent, de nombreux chercheurs privilégient l'analyse des paramètres clonogéniques des CSH, qui permet de déterminer le degré de maturité et le sens de différenciation des cellules progénitrices par la taille et la composition des colonies. Il est connu que lors du processus d'engagement, le nombre et les types de cellules dans la colonie diminuent. La cellule souche hématopoïétique et sa cellule fille précoce, appelée « unité formant colonie granulocyte-érythrocyte-monocyte-mégacaryocyte » (UFC-GEMM), créent en culture de grandes colonies multilignées contenant respectivement des granulocytes, des érythrocytes, des monocytes et des mégacaryocytes. L'unité formant colonie granulocyte-monocyte (UFC-GM), située en aval de la ligne d'engagement, forme des colonies de granulocytes et de macrophages, tandis que l'unité formant colonie granulocyte-G ne forme qu'une petite colonie de granulocytes matures. Le précurseur érythrocytaire précoce, l'unité formant une explosion d'érythrocytes (UFC-E), est à l'origine des grandes colonies érythrocytaires, et l'unité formant colonie érythrocytaire plus mature (UFC-E), des petites colonies érythrocytaires. En général, lorsque les cellules se développent sur des milieux semi-solides, on peut identifier des cellules qui forment six types de colonies myéloïdes: CFU-GEMM, CFU-GM, CFU-G, CFU-M, BFU-E et CFU-E).

Cependant, outre les dérivés hématopoïétiques, tout matériel source permettant d'isoler les CSH contient un nombre important de cellules associées. À cet égard, une purification préalable du greffon est nécessaire, en premier lieu à partir des cellules actives du système immunitaire du donneur. L'immunosélection est généralement utilisée à cette fin, basée sur l'expression d'antigènes spécifiques par les lymphocytes, ce qui permet de les isoler et de les éliminer à l'aide d'anticorps monoclonaux. Par ailleurs, une méthode d'immunorosette pour la déplétion des lymphocytes T des greffons de moelle osseuse a été développée. Elle repose sur la formation de complexes de lymphocytes CD4+ et d'anticorps monoclonaux spécifiques, éliminés efficacement par aphérèse. Cette méthode garantit la production de matériel cellulaire purifié contenant 40 à 60 % de cellules souches hématopoïétiques.

L'augmentation du nombre de cellules progénitrices, due à l'élimination des éléments figurés matures du sang du produit de leucaphérèse, est obtenue par centrifugation à contre-courant suivie d'une filtration (en présence d'un chélateur, le citrate trisodique) sur des colonnes contenant des fibres de nylon recouvertes d'immunoglobuline humaine. L'utilisation séquentielle de ces deux méthodes assure une purification complète du greffon (plaquettes, érythrocytes à 89 %) et des leucocytes à 91 %. Grâce à une diminution significative de la perte de CSH, le taux de cellules CD34+ dans la masse cellulaire totale peut être porté à 50 %.

La capacité des cellules souches hématopoïétiques isolées à former des colonies de cellules sanguines matures en culture est utilisée pour la caractérisation fonctionnelle des cellules. L'analyse des colonies formées permet d'identifier et de quantifier les types de cellules progénitrices, leur degré d'engagement et d'établir le sens de leur différenciation. L'activité clonogénique est déterminée en milieux semi-solides sur méthylcellulose, gélose, plasma ou gel de fibrine, qui réduisent la migration des cellules et empêchent leur fixation à la surface du verre ou du plastique. Dans des conditions de culture optimales, des clones se développent à partir d'une seule cellule en 7 à 18 jours. Si un clone contient moins de 50 cellules, il est identifié comme un cluster unique; si le nombre de cellules est supérieur à 50, il est identifié comme une colonie. Le nombre de cellules capables de former une colonie est pris en compte (unités formant colonie – UFC ou cellules formant colonie – COC). Il convient de noter que les paramètres de CFU et de COC ne correspondent pas au nombre de HSC dans la suspension cellulaire, bien qu'ils soient corrélés avec celui-ci, ce qui souligne une fois de plus la nécessité de déterminer l'activité fonctionnelle (formant des colonies) des HSC in vitro.

Parmi les cellules de la moelle osseuse, les cellules souches hématopoïétiques présentent le potentiel prolifératif le plus élevé, ce qui leur permet de former les plus grandes colonies en culture. Le nombre de ces colonies est proposé pour déterminer indirectement le nombre de cellules souches. Après la formation in vitro de colonies dépassant 0,5 mm de diamètre et comptant plus de 1 000 cellules, les auteurs ont testé la résistance de ces cellules à des doses sublétales de 5-fluorouracile et étudié leur capacité à repeupler la moelle osseuse d'animaux létalement irradiés. Selon les paramètres spécifiés, les cellules isolées étaient quasiment impossibles à distinguer des CSH et ont reçu l'abréviation HPP-CFC (cellules formant des colonies à haut potentiel prolifératif).

La recherche d'une meilleure qualité d'isolement des cellules souches hématopoïétiques se poursuit. Cependant, les cellules souches hématopoïétiques sont morphologiquement similaires aux lymphocytes et constituent un ensemble relativement homogène de cellules avec des noyaux presque ronds, une chromatine finement dispersée et une petite quantité de cytoplasme faiblement basophile. Leur nombre exact est également difficile à déterminer. On suppose que la fréquence des CSH dans la moelle osseuse humaine est de 1 pour 106 cellules nucléées.

Identification des cellules souches hématopoïétiques

Pour améliorer la qualité de l'identification des cellules souches hématopoïétiques, une étude séquentielle ou simultanée (sur un trieur multicanal) du spectre des antigènes liés à la membrane est réalisée, et dans les HSC le phénotype CD34+CD38 doit être combiné avec l'absence de marqueurs de différenciation linéaire, en particulier les antigènes des cellules immunocompétentes, tels que CD4, les immunoglobulines de surface et la glycophorine.

Presque tous les schémas de phénotypage des cellules souches hématopoïétiques incluent la détermination de l'antigène CD34. Cette glycoprotéine, d'un poids moléculaire d'environ 110 kDa et portant plusieurs sites de glycosylation, est exprimée sur la membrane plasmique après activation du gène correspondant localisé sur le chromosome 1. La fonction de la molécule CD34 est associée à l'interaction, médiée par la L-sélectine, des cellules progénitrices hématopoïétiques précoces avec la base stromale de la moelle osseuse. Cependant, il convient de rappeler que la présence de l'antigène CD34 à la surface cellulaire ne permet qu'une évaluation préliminaire de la teneur en CSH de la suspension cellulaire, car il est également exprimé par d'autres cellules progénitrices hématopoïétiques, ainsi que par les cellules stromales de la moelle osseuse et les cellules endothéliales.

Lors de la différenciation des cellules progénitrices hématopoïétiques, l'expression de CD34 est réduite de manière permanente. Les cellules progénitrices érythrocytaires, granulocytaires et monocytaires engagées expriment faiblement l'antigène CD34, voire pas du tout, à leur surface (phénotype CD34). L'antigène CD34 n'est pas détecté à la surface des cellules différenciées de la moelle osseuse et des cellules sanguines matures.

Français Il convient de noter que dans la dynamique de différenciation des cellules progénitrices hématopoïétiques, non seulement le niveau d'expression de CD34 diminue, mais aussi l'expression de l'antigène CD38, une glycoprotéine membranaire intégrale d'un poids moléculaire de 46 kDa, qui a une activité NAD-glycohydrolase et ADP-ribosyl cyclase, augmente progressivement, ce qui suggère sa participation au transport et à la synthèse de l'ADP-ribose. Ainsi, la possibilité d'un double contrôle du degré d'engagement des cellules progénitrices hématopoïétiques apparaît. La population de cellules avec le phénotype CD34+CD38+, qui constitue 90 à 99 % des cellules de moelle osseuse CD34-positives, contient des cellules progénitrices avec un potentiel prolifératif et différenciant limité, tandis que les cellules avec le phénotype CD34+CD38 peuvent prétendre au rôle de HSC.

En effet, la population cellulaire de moelle osseuse décrite par la formule CD34+CD38- contient un nombre relativement important de cellules souches primitives capables de se différencier dans les directions myéloïde et lymphoïde. La culture à long terme de cellules présentant le phénotype CD34+CD38- permet d'obtenir tous les éléments figurés matures du sang: neutrophiles, éosinophiles, basophiles, monocytes, mégacaryocytes, érythrocytes et lymphocytes.

Il a été établi relativement récemment que les cellules CD34-positives expriment deux autres marqueurs, AC133 et CD90 (Thy-1), également utilisés pour identifier les cellules souches hématopoïétiques. L'antigène Thy-1 est coexprimé avec le récepteur CD117 (c-kit) sur les cellules CD34+ de la moelle osseuse, du cordon ombilical et du sang périphérique. Il s'agit d'une glycoprotéine de surface liant le phosphatidylinositol, d'un poids moléculaire de 25 à 35 kDa, qui participe aux processus d'adhésion cellulaire. Certains auteurs pensent que l'antigène Thy-1 est un marqueur des cellules CD34-positives les plus immatures. Les cellules autoreproductrices présentant le phénotype CD34+Thy-1+ donnent naissance à des lignées cultivées à long terme avec formation de cellules filles. On suppose que l'antigène Thy-1 bloque les signaux régulateurs responsables de l'arrêt de la division cellulaire. Malgré le fait que les cellules CD34+Thy1+ soient capables d'auto-reproduction et de création de lignées cultivées à long terme, leur phénotype ne peut pas être attribué exclusivement aux HSC, car la teneur en Thy-1+ dans la masse totale des éléments cellulaires CD34-positifs est d'environ 50 %, ce qui dépasse largement le nombre de cellules hématopoïétiques.

L'AC133, un marqueur antigénique des cellules souches hématopoïétiques, dont l'expression a été détectée pour la première fois sur des cellules hépatiques embryonnaires, semble plus prometteur pour l'identification des cellules souches hématopoïétiques. L'AC133 est une glycoprotéine transmembranaire qui apparaît à la surface de la membrane cellulaire dès les premiers stades de maturation des CSH, probablement même plus tôt que l'antigène CD34. Les études d'A. Petrenko et V. Grishchenko (2003) ont montré que l'AC133 est exprimé par jusqu'à 30 % des cellules hépatiques embryonnaires CD34-positives.

Ainsi, le profil phénotypique idéal des cellules souches hématopoïétiques, selon les concepts actuels, consiste en un contour cellulaire dont les contours devraient inclure les configurations des antigènes CD34, AC133 et Thy-1, mais il n'y a pas de place pour les projections moléculaires de CD38, HLA-DR et les marqueurs de différenciation linéaire GPA, CD3, CD4, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20.

Une variante du portrait phénotypique des CSH pourrait être la combinaison CD34+CD45RalowCD71low, puisque les propriétés des cellules décrites par cette formule ne diffèrent pas des paramètres fonctionnels des cellules présentant le phénotype CD34+CD38. De plus, les CSH humaines peuvent être identifiées par les caractéristiques phénotypiques CD34+Thy-l+CD38Iow/'c-kit /low; seules 30 de ces cellules restaurent complètement l'hématopoïèse chez des souris létalement irradiées.

Les 40 années de recherche intensive sur les CSH, capables à la fois de s'auto-reproduire et de se différencier en d'autres éléments cellulaires, ont débuté par l'analyse des caractéristiques phénotypiques générales des cellules de la moelle osseuse, ce qui a permis de justifier le recours à la greffe de moelle osseuse pour le traitement de diverses pathologies du système hématopoïétique. Les nouveaux types de cellules souches découverts ultérieurement n'ont pas encore été largement utilisés en pratique clinique. Parallèlement, les cellules souches du sang de cordon ombilical et du foie embryonnaire sont susceptibles d'élargir considérablement l'échelle de la transplantation cellulaire, non seulement en hématologie, mais aussi dans d'autres domaines de la médecine, car elles diffèrent des CSH de la moelle osseuse tant par leurs caractéristiques quantitatives que qualitatives.

Le volume de cellules souches hématopoïétiques nécessaire à la transplantation est généralement obtenu à partir de moelle osseuse, de sang périphérique et de cordon ombilical, et de foie embryonnaire. De plus, des cellules progénitrices hématopoïétiques peuvent être obtenues in vitro par multiplication des cellules souches embryonnaires (CSE) puis différenciation dirigée en éléments cellulaires hématopoïétiques. A. Petrenko et V. Grishchenko (2003) soulignent à juste titre des différences significatives dans les propriétés immunologiques et la capacité à restaurer l'hématopoïèse des CSE d'origines diverses, dues à la proportion inégale de cellules progénitrices pluripotentes précoces et de cellules progénitrices engagées tardivement contenues dans leurs sources. De plus, les cellules souches hématopoïétiques obtenues à partir de différentes sources se caractérisent par des associations de cellules non hématopoïétiques totalement différentes, tant quantitativement que qualitativement.

La moelle osseuse est devenue une source traditionnelle de cellules souches hématopoïétiques. La suspension de cellules de moelle osseuse est obtenue à partir de l'ilion ou du sternum par lavage sous anesthésie locale. La suspension ainsi obtenue est hétérogène et contient un mélange de CSH, d'éléments de cellules stromales, de cellules progénitrices engagées de lignées myéloïdes et lymphoïdes, ainsi que d'éléments figurés matures du sang. Le nombre de cellules présentant les phénotypes CD34+ et CD34+CD38 parmi les cellules mononucléaires de moelle osseuse est respectivement de 0,5 à 3,6 % et de 0 à 0,5 %. Le sang périphérique après mobilisation des CSH induite par le G-CSF contient 0,4 à 1,6 % de CD34+ et 0 à 0,4 % de CD34+CD38.

Le pourcentage de cellules avec les immunophénotypes CD34+CD38 et CD34+ est plus élevé dans le sang du cordon ombilical - 0-0,6 et 1-2,6 %, et leur nombre maximal est détecté parmi les cellules hématopoïétiques du foie embryonnaire - 0,2-12,5 et 2,3-35,8 %, respectivement.

Cependant, la qualité du matériel transplanté dépend non seulement du nombre de cellules CD34+ qu'il contient, mais aussi de leur activité fonctionnelle, qui peut être évaluée par le niveau de formation de colonies in vivo (repeuplement de la moelle osseuse chez les animaux létalement irradiés) et in vitro – par la croissance des colonies sur des milieux semi-liquides. Il s'est avéré que l'activité de formation de colonies et de prolifération des cellules progénitrices hématopoïétiques de phénotype CD34+CD38 HLA-DR isolées du foie embryonnaire, de la moelle osseuse fœtale et du sang de cordon ombilical dépasse significativement le potentiel de prolifération et de formation de colonies des cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse et du sang périphérique d'un adulte. L'analyse quantitative et qualitative des CSH d'origines diverses a révélé des différences significatives tant dans leur teneur relative dans la suspension cellulaire que dans leurs capacités fonctionnelles. Le nombre maximal de cellules CD34+ (24,6 %) a été trouvé dans le matériel transplanté obtenu à partir de moelle osseuse fœtale. La moelle osseuse d'un adulte contient 2,1 % d'éléments cellulaires CD34-positifs. Parmi les cellules mononucléaires du sang périphérique d'un adulte, seulement 0,5 % présentent le phénotype CD34+, tandis que dans le sang de cordon, leur nombre atteint 2 %. Parallèlement, la capacité de formation de colonies des cellules CD34+ de la moelle osseuse fœtale est 2,7 fois supérieure à la capacité de croissance clonale des cellules hématopoïétiques de la moelle osseuse d'un adulte, et les cellules du sang de cordon ombilical forment significativement plus de colonies que les éléments hématopoïétiques isolés du sang périphérique d'un adulte: respectivement 65,5 et 40,8 colonies/105 cellules.

Les différences d'activité proliférative et de capacité de formation de colonies des cellules souches hématopoïétiques sont liées non seulement à leurs différents degrés de maturité, mais aussi à leur microenvironnement naturel. Il est connu que l'intensité de la prolifération et la vitesse de différenciation des cellules souches sont déterminées par l'effet régulateur intégral d'un système multicomposant de facteurs de croissance et de cytokines, produits à la fois par les cellules souches elles-mêmes et par les éléments cellulaires de leur microenvironnement matrice-stromal. L'utilisation de populations cellulaires purifiées et de milieux sans sérum pour la culture cellulaire a permis de caractériser les facteurs de croissance ayant un effet stimulant et inhibiteur sur les cellules souches de différents niveaux, les cellules progénitrices et les cellules engagées dans une direction linéaire ou une autre. Les résultats des études indiquent de manière convaincante que les CSH obtenues à partir de sources présentant différents niveaux de développement ontogénétique diffèrent à la fois phénotypiquement et fonctionnellement. Les CSH aux premiers stades de l'ontogenèse se caractérisent par un potentiel d'autoreproduction élevé et une activité proliférative élevée. Ces cellules se distinguent par des télomères plus longs et subissent un engagement pour former toutes les lignées cellulaires hématopoïétiques. La réponse du système immunitaire aux CSH d'origine embryonnaire est retardée, car ces cellules expriment faiblement les molécules HLA. Il existe une nette gradation du contenu relatif des CSH, de leur capacité d'auto-renouvellement et du nombre de types de lignées d'engagement qu'elles forment: cellules CD34+ du foie embryonnaire > cellules CD34+ du sang de cordon > cellules CD34+ de la moelle osseuse. Il est important de noter que ces différences sont inhérentes non seulement aux périodes intra-, néo- et postnatales précoces du développement humain, mais aussi à l'ontogenèse dans son ensemble: l'activité proliférative et de formation de colonies des CSH obtenues à partir de la moelle osseuse ou du sang périphérique d'un adulte est inversement proportionnelle à l'âge du donneur.