Cellules souches hématopoïétiques du sang du cordon ombilical

Le sang cordial agit comme une source de cellules souches hématopoïétiques sur le potentiel prolifératif et les capacités de repeuplement des cellules hématopoïétiques. Il a été démontré à plusieurs reprises que, au moment de l'accouchement, le sang du cordon ombilical contient un nombre suffisant de cellules progénitrices hématopoïétiques mal engagées. Certains auteurs pensent que l'intérêt de la transplantation de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon est qu'il n'est pas nécessaire de rechercher un donneur compatible avec les antigènes HLA. Selon eux, l'immaturité des causes du système immunitaire du nouveau-né diminution de l'activité fonctionnelle des cellules immunocompétentes et, par conséquent, plus faible que dans la transplantation de moelle osseuse, l'incidence de la réaction sévère « du greffon contre l'hôte ». Dans cette survie de greffe de cellules de sang de cordon ombilical est non inférieure à cellules de moelle osseuse, même dans le cas de l'utilisation d'un plus petit nombre de GSK administré par 1 kg de poids du patient. Cependant, à notre avis, le nombre optimal de questions transplanté des cellules de sang de cordon nécessaires à la prise de greffe efficace dans le corps du receveur, leur compatibilité immunologique, et un certain nombre d'autres aspects de la transplantation de cellules souches hématopoïétiques du sang de cordon ombilical nécessite une analyse plus sérieuse.

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Obtention de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon ombilical

La procédure d'obtention de cellules souches hématopoïétiques du sang du cordon ombilical nécessite sa prise immédiatement après la naissance et sa séparation du placenta, lorsque le placenta in utero ou ex utero, ainsi que pour une césarienne, mais aussi ex utero. Il est montré que dans le cas d'une réduction du temps de naissance à la séparation du nouveau-né du placenta à 30 secondes, le volume de sang de cordon obtenu augmente en moyenne de 25 à 40 ml. Avec une procédure ultérieure, la même quantité de sang est perdue. Il est établi que la séparation précoce de l'enfant de la post-combustion n'entraîne aucune conséquence négative pour le nouveau-né.

L'Institut de recherche russe d'hématologie et de transfusion sanguine développé une technologie efficace et peu coûteuse pour les sang du cordon ombilical à des lignées physiologiques ((70,2 + 25,8) ml) et la césarienne ((73,4 + 25,1) ml). Procédé de séparation du sang de cordon ombilical avec un rendement suffisamment élevé de cellules mononucléaires et nucléé - (83,1 + 9,6) et (83,4 + 14,1)%, respectivement. Procédé amélioré pour la cryoconservation de sang de cordon ombilical, ce qui assure une grande sécurité des cellules mononucléaires et CFU-GM - (96,8 + 5,7) et (89,6 + 22,6)%, respectivement. L'efficacité de la méthode de drainage de l'échantillon de sang de cordon à l'aide du conteneur «Kompoplast-300» (Russie) a été déterminée. Clôture auteurs du sang du cordon effectué immédiatement après la naissance et sa séparation du placenta, en termes de mise en place du placenta in utero ou ex utero. Avant la ponction de la veine ombilicale cordon ombilical une fois traité avec 5% de teinture d'iode, puis deux fois - 70% d'alcool éthylique. Le sang a traversé les tubes de liaison vers le récipient spontanément. La durée de la clôture n'a pas pris plus de 10 minutes. 66 recueilli des échantillons de sang ombilical de la méthode du volume de drainage en moyenne (72 + 28) ml, et le nombre de leucocytes dans l'échantillon en moyenne complet - (1,1 + 0,6) x x 107. L'analyse du sang du cordon ombilical de stérilité (contamination bactérienne, VIH-1 virus de l'hépatite B et C, la syphilis et l'infection par le cytomegalovirus) dans un seul échantillon ont été identifiés IgG-anticorps dirigés contre l'hépatite C. Dans une autre étude, une fois le placenta après surface foetal de naissance a été placé sur un châssis spécial vers le bas, le cordon a été traité avec 5% de sodium iode et 75% d'éthyle e alcool. Les veines du cordon ombilical ont été drainées avec une aiguille du système de transfusion (G16). Le sang s'est écoulé spontanément dans le récipient. Le volume de sang prélevé de cette manière était en moyenne de (55 + 25) ml. Le document G. Kogler et al sang prélevé manière fermée de cordon (1996) et obtenu de grands volumes de sang - en moyenne (79 + 26) ml. Les auteurs notent que, parmi 574 échantillons de sang de cordon contiennent environ 7% de moins de 40 ml de sang, ce qui ne permet pas de les utiliser pour la transplantation. K. Isoyama et al (1996), en prenant le sang de cordon ombilical par exfusion actif en utilisant des seringues, a reçu une moyenne de 69,1 ml de sang (volume de sang de cordon varie de 15 à 135 ml). Enfin, A. Abdel-Mageed collaborateurs PI (1997) par cathétérisme de la veine punovinnoy ont été obtenus dans un 94 ml moyen de sang de cordon (de 56 à 143 ml).

Pour réduire le risque d'infection iatrogène et de la contamination par les sécrétions maternelles développés collecte de sang en système fermé sur la base du système de transfuzioinoy largement utilisé Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), contenant 62,5 ml de CPDA (citrate-dextrose-phosphate avec l'adénine) comme anticoagulant. La technologie pour la production de matériau est d'une importance primordiale pour la préparation d'un échantillon de qualité par rapport à la quantité de contenu et la pureté de la suspension cellulaire. Parmi les méthodes existantes de collecte de sang de cordon, kotoryeuslovno classé dans fermé, système semi-ouvert et ouvert sleduetotdavat préférence d'abord, comme dans un système fermé réduit considérablement le risque de contamination microbienne de la matière, ainsi que la contamination de la suspension cellulaire de la cellule mère.

A. Nagler et ses coauteurs (1998) ont effectué une analyse comparative de l'efficacité des trois systèmes d'échantillonnage du sang de cordon. Dans la première variante, la procédure a été réalisée dans un système fermé par exfusion de sang directement dans le récipient. Dans la deuxième variante, le sang de cordon a été obtenu par la méthode d'exfusion sanguine active des seringues avec un lavage supplémentaire des veines du placenta et un drainage simultané du sang dans le récipient (méthode ouverte). Dans la troisième variante, le sang a été prélevé dans un système semi-ouvert en l'extrayant activement avec des seringues et en lavant l'artère du cordon ombilical avec une exfusion simultanée dans le récipient. Dans la première version, les auteurs ont reçu du sang de cordon ombilical dans le volume (76,4 + 32,1) ml avec un nombre de leucocytes (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ pour 1 ml de sang. Dans la deuxième variante, les indices correspondants étaient (174,4 + 42,8) ml et (8,8 + 3,4) x ¹⁰⁶ / ml; dans le troisième - (173,7 + 41,3) ml et (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. L'infection la plus fréquente des échantillons de sang de cordon ombilical a été notée lors de l'utilisation d'un système ouvert. Une corrélation directe entre la masse du placenta et le volume de sang extrait est établie - avec l'augmentation de la masse du placenta, la quantité de sang recueillie augmente.

Après l'échantillonnage du sang du cordon ombilical, l'étape de séparation suit: l'isolement des cellules mononucléaires et la purification de la suspension cellulaire à partir des érythrocytes. Dans les conditions expérimentales, les cellules nucléées sont isolées par la méthode de leur sédimentation à la méthylcellulose lors de la lyse des érythrocytes d'ammonium par le chlorure. Cependant, à des fins cliniques, la méthylcellulose ne doit pas être utilisée, car la perte de cellules souches hématopoïétiques atteint 50 à 90%. Lyse des globules rouges dans le cadre de grands volumes de la solution de travail dans la clinique aussi à peine réalisée, bien que le pourcentage de la séparation de cette manière les cellules nucléées avec le phénotype de CD34 + et les cellules progénitrices fonctions CFU-GM et CFU-GEMM considérablement plus élevé. Un nouvel agent pour l'isolement des cellules mononucléaires dans la solution de densité de l'acheteur de gradient de densité (BDS72) a été rapporté. Cette substance a les paramètres physiologiques suivants: pH - 7,4, osmolalité - 280 mosm / kg, densité - 1,0720 g / ml. Selon les auteurs, avec son aide, il est possible d'isoler jusqu'à 100% des cellules CD34-positives et d'éliminer 98% des globules rouges. Cependant, la clinique n'applique pas encore BDS72.

Les procédés de séparation testé les cellules nucléées du sang de cordon ombilical est généralement utilisé une solution de HES 10% ou 3% de solution de gélatine. L'efficacité de la précipitation des érythrocytes et l'isolement des cellules nucléées dans les deux cas est approximativement égale. Toutefois, dans le cas d'une utilisation en tant que gélatine agent sédimente possible d'obtenir un nombre un peu plus de CFU-GM, que lors de l'utilisation EME. On suppose que la différence d'efficacité de récupération de CFU-GM vitesse inégale en raison du dépôt des fractions individuelles ou des cellules nucléées capacité des molécules HES absorbés sur les récepteurs de surface des cellules hématopoïétiques et bloquer ainsi leur sensibilité à des facteurs de stimulation de colonies, qui sont utilisés lors de la culture CFU-GM in vitro. Néanmoins, les deux sédimenteurs pourraient bien convenir pour isoler des cellules nucléées lors de la création de banques de sang de cordon ombilical à grande échelle.

Les méthodes de séparation et de cryoconservation du sang du cordon ombilical ne diffèrent en principe pas de celles utilisées dans le travail avec les cellules souches hématopoïétiques du sang périphérique et de la moelle osseuse des donneurs adultes. Mais lors de la préparation d'un grand nombre d'échantillons de sang de cordon ombilical pour ses banques, les méthodes de séparation doivent être, tout d'abord, à faible coût. Par conséquent, maintenant, malheureusement, pour les besoins cliniques déjà utilisés des méthodes de routine d'isolement et de cryoconservation des cellules sanguines du cordon ombilical sont utilisés, et des méthodes plus efficaces mais financièrement efficaces restent le lot des expérimentateurs.

En général, les critères d'estimation du nombre de cellules hématopoïétiques et les exigences pour l'étude des échantillons de sang de cordon ombilical ont été établis afin d'identifier les agents infectieux. Afin d'assurer la transplantation des cellules sanguines du cordon hématopoïétique, tous les échantillons de sang doivent être examinés principalement pour les infections hématogènes et les maladies génétiques. Certains auteurs recommandent des méthodes spéciales supplémentaires d'étude du sang du cordon ombilical dans le but de diagnostiquer les maladies génétiques telles que la thalassémie et l'anémie falciforme, le déficit en adénosine désaminase, agammaglobulinemia Bruton, la maladie Harlera et punter.

Selon les recommandations Ticheli L. Et al (1998), dans chaque échantillon de sang de cordon ombilical est nécessaire de déterminer le nombre de cellules nucléées, des cellules SB34-positives et CFU-GM, effectuer HLA-typage pour déterminer le groupe sanguin ABO et Rh ses membres. En outre, l'ensemencement est effectué des tests bactériologiques, sérologiques pour le VIH et l'infection à CMV, HBsAg, l'hépatite C, HTLY-I et HTLV-II (leucémie à lymphocytes T, humaine), la syphilis, la toxoplasmose. Une réaction en chaîne de la polymérase contre le cytomégalovirus et l'infection par le VIH est obligatoire.

La procédure même pour l'obtention de sang de cordon doit être effectuée en stricte conformité avec les principes de la bioéthique médicale. Avant le début de la collecte de sang, il est nécessaire d'obtenir le consentement de la femme enceinte pour sa mise en œuvre. Un entretien préliminaire avec une femme enceinte pour obtenir un consentement éclairé pour effectuer toutes les manipulations, de l'exfusion sanguine à l'achèvement de la documentation, est effectué uniquement par le personnel médical. En aucun cas, il est acceptable d'effectuer une de ces procédures par du personnel ayant une formation biologique, chimique, pharmaceutique et autre non médicale, en raison de la violation des normes établies de bioéthique et des droits de l'homme. Pour les tests positifs pour HBsAg porte, des anticorps dirigés contre l'agent causal de l'hépatite C, le sang du cordon VIH et Syphilis pas pris, et les échantillons de sang prélevés est déjà mis au rebut et détruit. Il convient de noter que le transport d'infections latentes chez les nouveau-nés est beaucoup plus rare que chez les adultes, donc la probabilité de transfert hématogène et le développement des complications infectieuses des perfusions hématopoïétique de cellules de sang de cordon est significativement plus faible que dans le cas de la transplantation de la moelle osseuse de donneurs adultes.

Un point important dans l'application de sang de cordon dans la clinique est l'évaluation de la greffe, qui est basée sur la détermination du nombre de cellules souches hématopoïétiques dans l'échantillon de sang de cordon et les doses cellulaires nécessaires pour la transplantation. Les normes relatives au nombre optimal de cellules sanguines du cordon ombilical nécessaires à la transplantation n'ont pas encore été établies. Il n'y a pas de point de vue généralement accepté même sur des paramètres de routine tels que le nombre de cellules CD34-positives et CFU-GM. Certains auteurs ont évalué le potentiel des cellules hématopoïétiques par l'analyse des cultures à long terme avec détermination de la teneur en unités formant des colonies communes à granulocytes, érythrocytes, les monocytes et les mégacaryocytes - UFC-GEMM.

Cependant, dans les milieux cliniques, l'évaluation standard de la transplantation de sang de cordon inclut habituellement seulement la détermination du nombre de cellules nucléées ou mononucléaires.

Stockage des cellules souches hématopoïétiques du sang du cordon ombilical

Certains problèmes existent dans la technologie de stockage des cellules sanguines du cordon hématopoïétique. Lorsque la cryoconservation des cellules souches hématopoïétiques afin d'atteindre leur mode optimal de congélation doit minimiser la quantité de cellules du sang de cordon ombilical et le sang rouge précédemment enlevés pour éviter hémolyse et le risque de réaction d'incompatibilité des antigènes érythrocytaires (ABO, Rh). A ces fins, diverses méthodes d'isolement des cellules nucléées sont appropriées. Dans le début des années 90 du siècle dernier, la méthode la plus largement utilisée de séparation de cellules nucléées dans un gradient de densité sur la base de Ficoll ayant une densité de 1,077 g / ml, ou par percolation avec une densité de 1,080 g / ml. Le sang de cordon de séparation par gradient de densité permet de sélectionner des cellules mononucléaires de façon prédominante, mais conduit à des pertes considérables de cellules progénitrices hématopoïétiques - jusqu'à 30-50%.

L'efficacité de sédimentation de l'hydroxyéthylamidon dans le processus d'isolement des cellules sanguines du cordon ombilical est estimée de différentes manières. Certains auteurs indiquent une faible qualité de séparation en utilisant cette méthode, alors que d'autres chercheurs, au contraire, préfèrent, parmi toutes les méthodes possibles, allouer du sang de cordon HSC précisément en utilisant une solution à 6% d'hydroxyéthylamidon. Cela met en évidence le haut rendement de la sédimentation des cellules hématopoïétiques, qui, selon certaines données, atteint 84% à 90%.

Les partisans d'un autre point de vue pensent que presque tous les procédés de fractionnement impliquent de grandes pertes cellules yadrosoderzhashih et proposent de faire une séparation par centrifugation, la séparation du sang de cordon ombilical en 3 fractions: erythrocytes, leucocytes et anneau de plasma. La séparation des cellules de cette manière, les inventeurs ont constaté que le contenu des cellules mononucléaires des premières cellules souches hématopoïétiques et des cellules CD34 + immunophénotypage était finalement respectivement 90, 88 et 100% du niveau initial. Des quantités similaires de croissance purifiée dans ce mode de ombilicaux cellules de sang de cordon obtenus par d'autres chercheurs: après sédimentation nucléées alloué 92%, 98% - mononucléaire, 96% - cellules CD34-positives et 106% des unités formant des colonies.

À la fin des années 1990, la gélatine était largement utilisée comme agent de sédimentation. En pratique clinique, à l'aide de gélatine, des cellules souches hématopoïétiques provenant du sang du cordon ombilical ont été isolées depuis 1994. Lorsqu'on utilise une solution de gélatine à 3%, l'efficacité de l'isolement des cellules nucléées atteint 88-94%. L'utilisation généralisée de la gélatine dans le développement de la banque de sang de cordon a confirmé ses avantages par rapport aux autres agents de sédimentation. Une analyse comparative de l'ensemble des procédés d'isolement de cellules nucléées ci-dessus en ce qui concerne leur utilisation séquentielle dans chacun des échantillons de sang de cordon d'essai a montré que les cellules optimales mononucléaires sédimenter-out avec le phénotype CD34 + / CD45 +, ainsi que par le nombre de CFU-GM et CFU-GEMM est de 3% solution de gélatine. Il est avéré être significativement moins efficace des méthodes utilisant un gradient de densité Ficoll et l'utilisation de la méthyl cellulose et l'amidon hydroxyéthylé dans laquelle la perte de cellules hématopoïétiques a atteint 60%.

L'expansion du volume de la greffe de cellules souches du sang du cordon ombilical est associée non seulement au développement de méthodes pour leur production, mais aussi au stockage. De nombreux problèmes sont directement liés à la préparation du sang du cordon ombilical pour le stockage à long terme et au choix de la technologie de cryoconservation optimale pour ses échantillons. Parmi ceux-ci figurent les questions de l'opportunité d'effectuer des procédures de séparation, l'utilisation de divers milieux de cryoconservation et l'utilisation de méthodes pour préparer des cellules décongelées en vue d'une transplantation. Le transport d'échantillons indigènes de sang de cordon est souvent effectué à partir de régions éloignées des centres hématologiques. En relation avec cela, le problème se pose des périodes admissibles pour le stockage du sang de cordon à partir du moment de sa réception jusqu'au début de la cryoconservation, ce qui est particulièrement important dans le développement des banques de sang de cordon.

L'étude de l'activité fonctionnelle des cellules hématopoïétiques du sang de cordon après stockage à long terme (jusqu'à 12 ans) dans l'azote liquide a révélé qu'environ 95% des cellules hématopoiétiques pendant ce temps ne perdent pas leur grande capacité proliférative. Le document Yurasova S. Et al (1997) ont démontré que le sang de cordon stocké à température ambiante (22 ° C) ou à 4 ° C pendant 24 et 48 heures ne réduit pas sensiblement la viabilité des cellules hématopoïétiques que le niveau initial est de manière appropriée 92 et 88%. Cependant, si le temps de stockage est prolongé à trois jours, le nombre de cellules nucléées viables dans le sang du cordon est significativement réduit. Dans le même temps, au cours d'autres études, il a été constaté que lorsqu'il est stocké pendant 2-3 jours à une température de 22 ou 4 ° C, la viabilité des granulocytes matures, plutôt que des cellules hématopoïétiques, affecte principalement.

La viabilité des cellules souches hématopoïétiques du sang de cordon peut être affectée par les composants du système pour sa collecte. L'analyse de l'effet des anticoagulants différents, dont le mécanisme d'action est due à la liaison des ions calcium (ACD, EDTA, XAPD-1) pour des cellules progénitrices hématopoïétiques dans les conditions de stockage de sang de cordon de 24 à 72 heures a révélé leur impact négatif sur la viabilité des cellules nucléées. A cet égard, les auteurs recommandent l'utilisation de PBS (solution tampon phosphate) avec l'addition de l'héparine native sans conservateur à une concentration de 20 U / ml, ce qui, à leur avis, permet d'augmenter la durée de stockage non fractionnée jusqu'à de sang de cordon 72 heures et enregistre l'activité fonctionnelle des unités formant des colonies. Cependant, en étudiant l'innocuité de CFU-GM et CFU-G, il est montré que le temps de stockage du sang de cordon avant la cryoconservation ne doit pas dépasser neuf heures. Il est évident que, dans ce cas, devrait agir le principe selon lequel s'il y a des données contradictoires doivent utiliser la durée de conservation du sang de cordon minimum recommandé et commencer une congélation programmables cellules isolées le plus rapidement possible.

Lors de la congélation des cellules souches hématopoïétiques du sang du cordon ombilical, une solution à 10% de DMSO est habituellement utilisée comme cryoprotecteur. Cependant, en plus de l'effet cryoprotecteur exprimé, le diméthylsulfoxyde dans cette concentration a un effet cytotoxique direct, même dans des conditions d'exposition minimale aux cellules hématopoïétiques du sang du cordon ombilical. Pour réduire l'effet cytotoxique du DMSO, une température d'exposition nulle, une augmentation de la vitesse de toutes les manipulations et un lavage répété après décongélation des échantillons de cordon ombilical sont appliqués.

L'Institut d'Hématologie et de Transfusiologie de l'Académie des Sciences Médicales d'Ukraine a développé une direction scientifique depuis 1995, dont le but est d'étudier le sang de cordon comme une source alternative de cellules souches hématopoïétiques. En particulier, de nouvelles technologies de cryoconservation à basse température des cellules hématopoïétiques de sang de cordon non fractionné et fractionné ont été développées. En tant que cryoprotecteur, on utilise une polyvinylpyrrolidone médicale de faible poids moléculaire. La méthode de cryoconservation de sang de cordon non fractionné est basée sur la technologie originale de pré-préparation des cellules pour la congélation et la technique de traitement spécial de la suspension cellulaire immédiatement avant la transplantation.

L'un des facteurs les plus importants affectant le niveau d'activité fonctionnelle des cellules souches hémopoïétiques cryoconservées est la vitesse de refroidissement de la suspension cellulaire, en particulier pendant la phase de cristallisation. Une approche logicielle pour résoudre le problème de la vitesse et du temps de congélation offre de grandes opportunités pour créer des méthodes de cryoconservation simples et très efficaces, sans laver la suspension cellulaire des cryoprotecteurs avant la transplantation.

Les étapes de congélation et de décongélation immédiates sont les plus dangereuses pour la viabilité des cellules au cours de leur préparation. Lors de la congélation des cellules hématopoïétiques, une partie significative de celles-ci peut être détruite au moment de la transition du milieu intercellulaire de la phase liquide à la phase solide - cristallisation. Pour réduire le pourcentage de mort cellulaire, des cryoprotecteurs sont utilisés, dont les mécanismes d'action et l'efficacité cryoprotectrice ont été couverts de manière adéquate dans la littérature scientifique.

Une voie prometteuse techniques d'optimisation de cryoconservation de la moelle osseuse et ombilicaux cellules de sang de cordon est de combiner dans la même solution à de faibles concentrations de cryoprotecteurs avec plusieurs mécanismes d'action différents, par exemple, agir sur le taux intracellulaire du DMSO et de l'amidon d'hydroxyéthyle ou de l'albumine possédant effet extracellulaire d'enceinte.

Pour la cryoconservation des cellules de sang de cordon sont traditionnellement utilisé 20% de solution de DMSO, qui est en permanence en remuant mécaniquement dans un bain de glace, on a versé lentement dans la suspension de cellules pour obtenir l'égalité (1: 1) le rapport en volume de la suspension cellulaire et le cryoprotecteur. La concentration finale en diméthylsulfoxyde est de 10%. La suspension cellulaire a été refroidie sur un programme à une vitesse krioustanovke HS / min à -40 ° C, après quoi la vitesse de refroidissement a été augmentée à 10 ° C / min. Après avoir atteint -100 ° C, le récipient contenant la suspension cellulaire est placé dans de l'azote liquide (-196 ° C). Avec cette méthode de cryoconservation, la sécurité des cellules mononucléaires fonctionnellement actives après décongélation atteint 85% du niveau initial.

Les modifications des méthodes de cryoconservation visent à réduire la concentration de DMSO en ajoutant de l'hydroxyéthylamidon (les concentrations finales de diméthylsulfoxyde et d'hydroxyéthylamidon sont respectivement de 5% et 6%). Le rendement élevé de cette combinaison de cryoprotecteurs est observé lorsque la suspension de cellules myéloïdes est congelée, avec pas moins de cytoprotection qu'avec une solution unique à 10% de diméthylsulfoxyde. Le nombre de cellules nucléées viables a atteint 96,7% du niveau de base, et leur activité fonctionnelle, estimée par le nombre de CFU-GM, était de 81,8%.

Lors de l'utilisation de la solution de diméthylsulfoxyde à des concentrations allant de 5 à 10% en combinaison avec 4% d'amidon hydroxyéthylique (concentration finale) ont constaté que la conservation de cellules CD34-positives dans ces gammes diméthylsulfoxyde pratiquement inchangée. Dans le même temps dans des conditions de réduction de la concentration de DMSO de 5 à 2,5%, on observe la mort massive de cellules de sang de cordon ombilical - nombre d'unités de cellules viables est réduit de 85,4 à 12,2%. D'autres auteurs ont également conclu qu'il était solution 5 et 10% de sulfoxyde de diméthyle (dans le mode de réalisation du droit d'auteur - en combinaison avec du sérum autologue) avec une efficacité maximale lors de la cryoconservation fournir cytoprotection de HSC de sang de cordon. En outre, de façon séquentielle de sécurité élevé congelé et décongelé cellule est marquée dans le cas de la combinaison de 5 ou 10% de DMSO 4% d'une solution d'amidon d'hydroxyéthyle, en particulier à une vitesse de refroidissement contrôlé de TOS / min. Dans un autre papier utilisé solution cryoprotectrice comprenant trois ingrédients déjà - DMSO, l'albumine humaine purifiée et de milieu RPMI dans un rapport de 1: 4: 5, qui a été ajouté à la suspension cellulaire jusqu'à un taux de volume égal (concentration finale de DMSO était de 5%). Après décongélation dans un bain-marie à une température de + 4 ° C, la sécurité du CFU-GM a dépassé 94%.

Certains auteurs suggèrent d'utiliser du sang de cordon non fractionné pour la cryoconservation, car des quantités significatives de cellules hématopoïétiques sont perdues lors de l'élimination des globules rouges. Dans ce mode de réalisation, une solution à 10% de diméthylsulfoxyde est utilisée pour protéger les cellules mononucléaires contre les effets dommageables de la cryocristallisation. La congélation est effectuée à une vitesse de refroidissement constante de HS / min à -80 ° C, après quoi la suspension de cellules sanguines du cordon ombilical est immergée dans l'azote liquide. Avec cette méthode de congélation, une lyse partielle des érythrocytes a lieu, par conséquent les échantillons de sang ne nécessitent pas de fractionnement. Après décongélation, la suspension cellulaire est lavée de l'hémoglobine libre et du diméthylsulfoxyde dans une solution d'albumine humaine ou dans le sérum autologue du patient et utilisée pour la transplantation.

La préservation des cellules progénitrices hématopoïétiques après décongélation non fractionnée sang de cordon est bien plus élevé que le fractionne, mais en rapport avec krioustoychivostyu des globules rouges peut causer des problèmes graves à la suite de la transfusion post-transfusion de globules rouges incompatibles ABO. De plus, le volume de sang non fractionné stocké augmente significativement. D'un point de vue clinique, il est encore préférable de cryoconserver pré-isolé et purifié à partir d'autres fractions cellulaires de cellules sanguines du cordon hématopoïétique.

En particulier, un procédé est la cryoconservation des cellules de sang de cordon fractionnés permettant enlever les erythrocytes en vue de la congélation, qui utilise une solution à 6% d'hydroxyéthylamidon dans la solution de composition plazmozameshchath « Stabizol ». Après décongélation, la suspension cellulaire ainsi obtenue est prête à l'emploi clinique sans manipulation supplémentaire.

Ainsi, à l'heure actuelle, il existe de nombreux moyens très efficaces de cryoconservation du sang du cordon ombilical. La principale différence est que les échantillons de sang sont congelés non fractionnés ou soumis à une séparation en fractions cellulaires au cours de la phase de préparation et des cellules nucléées récoltées sans mélange d'érythrocytes.

Transplantation de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon ombilical

À la fin des années 80 - début des années 90 du siècle dernier, il a été constaté que le sang du cordon ombilical fournissant le fœtus pendant la grossesse est caractérisé par une forte teneur en cellules souches hématopoïétiques. La simplicité relative de l'obtention de cellules sanguines du cordon ombilical et l'absence de problèmes éthiques évidents ont favorisé l'utilisation de cellules souches du sang de cordon dans la pratique médicale. La première transplantation réussie de sang de cordon à un enfant atteint d'anémie de Fanconi a servi de point de départ à l'expansion des volumes de transplantation de cellules souches du sang de cordon et à la création d'un système pour sa fourniture de banque. Dans le système mondial des banques de sang de cordon, le plus important est le Centre de sang placentaire de New York, qui figure sur le bilan des National Institutes of Health. Le nombre d'échantillons de sang de cordon stockés dans cette banque approche 20 LLC. Le nombre de receveurs (principalement des enfants) augmente également et une greffe réussie a été effectuée. Selon le département américain de la Santé, la période sans rechute de la vie post-transplantation des receveurs de sang de cordon HSC a déjà dépassé 10 ans.

Ce n'est pas surprenant, car de nombreuses études sur le potentiel hématopoïétique de sang du cordon ombilical ont montré que la quantité et la qualité des cellules souches plus anciennes, non seulement ne sont pas inférieurs à un os humain adulte osseuse, mais aussi par des mesures dépasser. Un potentiel prolifératif plus élevé de cellules souches de sang de cordon a causé des caractéristiques de signalisation cellulaire de développement, la présence de récepteurs sur CSHs à des facteurs de croissance spécifiques, la capacité des cellules de sang de cordon pour autocrine la production de facteurs de croissance, la grande taille et la longueur des télomères.

Ainsi, les caractéristiques génomiques et phénotypiques des cellules souches hématopoïétiques de la qualité prédéterminer de sang de cordon fort potentiel de récupération greffe hématopoïétique donneur chez le receveur.

Avantages des cellules souches hématopoïétiques du sang du cordon ombilical

Parmi les réels avantages de l'utilisation des cellules souches de sang de cordon hématopoïétique pour la transplantation sur d'autres sources de cellules hématopoïétiques, il convient de noter presque zéro risque pour la santé du donneur (sinon considéré comme un placenta), tout en éliminant la nécessité d'une anesthésie générale. L'utilisation de sang de cordon ombilical étend les possibilités de transplantation cellulaire en raison de la transplantation partiellement compatible dans le système HLA (incompatibilité de un à trois antigènes). La technique du stockage à long terme de cellules de sang de cordon hématopoïétiques à l'état congelé, ce qui augmente la probabilité d'obtenir rare HLA-type et réduit greffe allogénique HLA compatible temps de recherche. En même temps, le risque de développer certaines infections latentes transmises par voie de transmission est significativement réduit. En outre, il existe une forme peu coûteuse d'assurance-vie biologique en rapport avec la possibilité d'utiliser des cellules de sang de cordon pour une transplantation autologue.

Toutefois, en raison de faibles volumes de sang qui peuvent être recueillies à partir du placenta (en moyenne pas plus de 100 ml) en avant le problème d'obtenir le montant maximum de sang de la veine du cordon ombilical en stricte conformité avec les conditions de risque minimal de contamination bactérienne du sang du cordon ombilical des échantillons dérivés.

Les cellules hématopoïétiques primitives de sang de cordon ombilical sont généralement identifiés par la présence sur leur glikofosfoproteina de surface CD34, et sur la base de leurs propriétés fonctionnelles, en examinant le dosage clonogénique ou formation de colonies in vitro. L'analyse comparative a montré que dans le sang de cordon et de moelle osseuse teneur maximale des cellules mononucléées CD34-positives dans la fraction sont respectivement 1,6 et 5,0%, le niveau maximal d'unités formant des colonies dans une sous-population de cellules CD34 + - 80 et 25%, l'efficacité de clonage total de CD34 + -Cells - 88 et 58%, la colonie maximale formant des cellules à haut potentiel prolifératif (HPP-CFC à + -populyatsii CD34) - 50 et 6,5%. Il faut ajouter que l'efficacité de clonage de cellules CD34 + CD38 et la capacité de répondre à la stimulation des cytokines également plus élevée dans les cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon.

Combinaison d'antigènes phénotypiques Thy-1, CD34 et CD45RA confirme la capacité de prolifération élevé de cellules hématopoïétiques de sang de cordon, et l'expression des trois antigènes à la surface des cellules de sang de cordon indique qu'ils appartiennent à la cellule souche. De plus, il a été établi que le sang de cordon contient des cellules avec un phénotype CD34 + qui n'ont pas de marqueurs de différenciation linéaires. Le niveau dans le sang du cordon ombilical des sous-populations cellulaires avec le profil phénotypique de CD34 + / Lin est d'environ 1% du nombre total de cellules positives pour CD34. Les cellules souches hématopoïétiques donnent naissance au sang du cordon ombilical comme des lignées cellulaires lymphoïdes, et un certain nombre de différenciation des cellules myéloïdes pluripotentes linéaire, ce qui indique aussi qu'ils appartiennent aux cellules souches.

Comme déjà mentionné, les différences essentielles entre la moelle osseuse et le sang de cordon ombilical sont en une quantité obtenue par une procédure d'échantillonnage utilisée pour la transplantation de cellules hématopoïétiques. Lorsque la perte de greffe de moelle osseuse de la masse cellulaire dans le processus de séparation, la cryoconservation, la décongélation et le test sont admissibles dans la plage de 40 à 50%, les cellules de sang de cordon telle perte est très importante, étant donné que lors de l'utilisation du nombre insuffisant de greffe HSC peut être inacceptable. Selon G. Kogler et al (1998), pour la transplantation de cellules dans le poids corporel du receveur de 10 kg de greffe potentiel (nombre total des échantillons de sang de cordon recueillies - 2098) peuvent être tous les échantillons de sang de cordon, poids corporel de 35 kg - 67%, et seulement 25% des échantillons peuvent fournir une transplantation efficace chez les patients pesant entre 50 et 70 kg. Cette situation clinique indique la nécessité d'optimiser et d'améliorer l'efficacité des méthodes existantes d'échantillonnage, de reproduction et de stockage des cellules sanguines du cordon ombilical. Par conséquent, les questions de normalisation des méthodes d'échantillonnage, les essais, la séparation et la cryoconservation du sang de cordon est maintenant largement discuté dans la littérature pour la création de banques de sang, son utilisation dans la clinique, ainsi que l'établissement des conditions et modalités de stockage des cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon.

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L'utilisation de cellules souches hématopoïétiques du sang du cordon ombilical en médecine

Habituellement, jusqu'à 10 ⁶ cellules souches hématopoïétiques peuvent être isolées du sang du cordon ombilical , rarement plus. En rapport avec cela, jusqu'à aujourd'hui, la question demeure de la suffisance de tant de cellules sanguines hématopoïétiques pour restaurer l'hématopoïèse du receveur adulte. Les opinions sur cette question étaient partagées. Certains chercheurs pensent que ce montant est suffisant pour les enfants de transplantation, mais trop petit pour transplanter humain adulte, dont l'administration est optimale (7-10) × 10 ⁶ cellules CD34-positives par 1 kg de poids corporel - moyenne de 7 × 10 ⁸ par greffe. Il ressort de ces calculs qu'un échantillon de cordon ombilical contient 700 fois moins de cellules souches hématopoïétiques que ce qui est nécessaire pour une transplantation chez un patient adulte. Cependant, une telle évaluation quantitative est faite par analogie avec le nombre de cellules transfusées dans la moelle osseuse et ignore complètement les caractéristiques ontogénétiques de l'hématopoïèse.

Il ne tient pas compte, en particulier, le fait que la capacité proliférative plus élevée de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon par rapport aux cellules souches hématopoïétiques de la moelle osseuse. Les résultats des études sur le potentiel de formation de colonies in vitro suggèrent qu'une dose de sang de cordon peut fournir une reconstitution de l'hématopoïèse chez le receveur adulte. D'autre part, il ne faut pas oublier que le nombre de cellules souches hématopoïétiques diminue même dans le processus de développement embryonnaire: le contenu des cellules CD34-positives dans le sang du cordon ombilical est réduite linéairement 5 fois dans une période de 20 semaines (sang pour l'étude a été obtenu en cas de rupture prématurée de la grossesse) à 40 semaines de gestation (la période des naissances physiologiques), qui s'accompagne d'une augmentation parallèle et permanente de l'expression des marqueurs linéaires de cytodifférenciation.

En raison de l'absence d'une approche normalisée pour la quantification des cellules progénitrices dans les échantillons de sang de cordon ombilical, la controverse sur la dose optimale de cellules souches hématopoïétiques du sang de cordon continue. Certains chercheurs pensent que le nombre de cellules nucléées et de cellules mononucléées, recalculées pour le poids corporel du receveur, c'est-à-dire leur dose, peut être utilisé comme critère de sélection des échantillons de cordon ombilical. Certains auteurs pensent que le seuil quantitatif minimum des cellules CD34 +, même pour la réalisation de la transplantation autologue de CSH, est de 2 x 10 ⁶ / kg. Dans le même temps, l'augmentation de la dose de cellules hémopoïétiques à 5 x 10 ⁶ cellules / kg (seulement 2,5 fois) permet déjà une évolution plus favorable de la période post-transplantation, réduit la fréquence des complications infectieuses et raccourcit la durée de la antibiothérapie préventive.

Selon E. Gluckman et al (1998) en hématologie pour une transplantation réussie de cellules de sang de cordon ombilical est la mise en place d'au moins 3,7 × 10 ⁷ cellules nucléées pour 1 kg de poids corporel du receveur. Avec une diminution de la dose de cellules souches hématopoïétiques à 1 x 10 ⁷ et moins de cellules nucléées pour 1 kg de poids corporel, le risque d'échec de la greffe et de récurrence du cancer est fortement augmenté. Il faut reconnaître que le nombre minimum de cellules progénitrices nécessaires pour la récupération rapide de l'hémopoïèse après allogreffe de GSG n'est pas encore connu. En théorie , cela peut être réalisé en utilisant une seule cellule, mais dans une transplantation de moelle osseuse clinique prise de greffe rapide et stable transfusion garanti au moins (1-3) x 10 ⁸ cellules nucléées pour 1 kg de poids corporel du patient.

Une étude détaillée récente pour déterminer la quantité optimale de CSH en oncohématologie a inclus l'observation de patients de trois groupes isolés en fonction de la teneur en cellules positives au CD34 dans le matériel de greffe. Les patients du premier groupe ont reçu (3-5) x 10 ⁶ cellules / kg. GSK dose chez les patients du second groupe est élevée à (5-10) x 10 ⁶ cellules / kg et le troisième groupe de patients transplantés plus de 10 x 10 ⁶ cellules CD34 + / kg. Les meilleurs résultats ont été observés dans le groupe des receveurs recevant une greffe avec le nombre de cellules CD34-positives égal à (3-5) x 10 ⁶ / kg. Avec une augmentation de la dose de cellules transplantées au-dessus de 5 × 10 ⁶ / kg, aucun avantage statistiquement significatif n'a été identifié. En même temps, une très grande quantité de HSC dans le transplant (> 10 x 10 ⁶ / kg) est associée à la réinjection d'un nombre important de cellules tumorales résiduelles, ce qui conduit à une rechute de la maladie. Il n'y avait pas de relation directe entre le nombre de cellules progénitrices allogéniques transplantées et le développement de la réaction «greffon contre hôte».

L'expérience mondiale accumulée de la transplantation de sang de cordon HSC confirme leur potentiel élevé de repeuplement. Le taux de prise de greffe de la greffe de sang de cordon est en corrélation avec le nombre de cellules nucléées introduites. Les meilleurs résultats sont observés avec une transplantation de 3 × 10 ⁷ / kg, alors que pour la moelle osseuse, cette dose est de 2 × 10 ⁸ / kg. Selon les données des centres de coordination, à la fin de l'année 2000, 1200 greffes de cellules du sang de cordon ombilical ont été réalisées dans le monde, principalement à partir de donneurs apparentés (83%). De toute évidence, le sang de cordon doit être considéré comme une alternative à la moelle osseuse pour la transplantation chez les patients atteints d'hémoblastose.

Cependant, la nature néonatale Cordova source de tissu hématopoïétique encourageant en raison de la présence de caractéristiques fonctionnelles de son GCW. Cependant, l'expérience clinique peut donner une réponse à la question de l'adéquation d'un échantillon de sang de cordon ombilical pour la reconstitution hématopoïétique adulte du destinataire avec aplasie de l'hématopoïèse. La transplantation de cellules de sang de cordon est utilisé dans le traitement de nombreuses maladies de la tumeur et la nature non-tumeur: les leucémies et les syndromes myélodysplasiques, le lymphome non hodgkinien, et neuroblastome, anémie aplasique, anémie de Fanconi congénitale et Diamant ventilateur noir, un déficit d'adhésion leucocytaire, le syndrome de Barr, le syndrome de la maladie Gunther Harlera, thalassémie .

Une attention particulière et une recherche séparée méritent les aspects immunologiques de la transplantation de cellules hématopoïétiques du sang du cordon ombilical. On montre que dans le cas d'une transplantation de cellules souches de sang de cordon provenant de donneurs avec les résultats incomplets de transplantation HLA compatible sont tout à fait satisfaisant, que, selon les auteurs, ce qui indique un sang de cordon immunoréactivité inférieure à la moelle osseuse.

Une étude détaillée de la composition cellulaire du sang du cordon ombilical a montré les caractéristiques des deux spectre phénotypique des cellules effectrices du système immunitaire et leur activité fonctionnelle, ce qui permet de considérer le sang de cordon comme source de cellules souches hématopoïétiques avec un risque relativement faible de la réaction « du greffon contre l'hôte ». Caractéristiques supplémentaires immaturité fonctionnelle des cellules de sang de cordon immunocompétent devrait être noté déséquilibre de la production de cytokines et une diminution de la sensibilité aux cytokines nouvelle régulation de la réponse immunitaire. L'inhibition résultante de l'activité lymphocytaire cytotoxique est considérée comme un facteur contribuant à la formation d'une tolérance immunologique au tissu hématopoïétique transplanté. Dans la population lymphocytaire du cordon ombilical, contrairement au sang périphérique et à la moelle osseuse des donneurs adultes, les lymphocytes immatures et immatures et les cellules suppressives prédominent. Cela indique une disponibilité réduite des lymphocytes T du sang de cordon dans la réponse immunitaire. Une caractéristique importante de la population monocytaire des cellules sanguines du cordon ombilical est la faible teneur en cellules présentatrices d'antigène fonctionnellement complètes et actives.

D'une part, un faible degré de maturité des cellules effectrices du système immunitaire dans les lectures de sang de cordon s'étend son utilisation dans la clinique, puisque ces caractéristiques permettent la réduction de l'intensité du conflit immunitaire entre les cellules du donneur et du receveur. Mais, d'autre part, nous savons que l'existence d'une corrélation entre le degré de réaction « maladie du greffon contre l'hôte » et greffe effet antitumoral, par exemple, l'effet du développement de « greffon contre la leucémie ». Dans le cadre de cette étude cytotoxicité anti-tumorale des cellules de sang de cordon a été réalisée. Les résultats indiquent que, malgré la réponse immunitaire vraiment affaibli des cellules de sang de cordon à une stimulation antigénique, activées en premier lieu sont les cellules tueuses naturelles et les cellules killeropodobnymi qui sont activement impliqués dans les mécanismes de mise en œuvre de la cytotoxicité anti-tumorale. En outre, dans les sous-populations de lymphocytes de sang de cordon ont été trouvés avec le phénotype CD16 + CD56 + et CD16 « TCRA / p +. On suppose que ces cellules sont sous une forme activée de mettre en œuvre la réaction » du greffon contre la leucémie ».

A l'Institut d'oncologie, Académie des sciences médicales de l'Ukraine cryoconservés cellules hématopoïétiques du sang du cordon ombilical ont été administrés aux patients atteints de cancer avec une hypoplasie persistante de l'hématopoïèse due à la chimiothérapie et la radiothérapie. Chez ces patients, la transplantation de cellules souches hématopoïétiques du sang de cordon oppression du sang rétabli efficacement, comme en témoigne une élévation persistante des éléments formés matures dans le sang périphérique, ainsi qu'une augmentation des indicateurs caractérisant l'état de l'immunité cellulaire et humorale. La stabilité de l'effet de repopulation après la transplantation de cellules hématopoïétiques du sang du cordon ombilical permet de poursuivre la radiothérapie et la chimiothérapie sans interrompre le cours du traitement. Il existe des preuves de plus patients sang du cordon ombilical des cellules souches allogreffes efficacité du cancer: le risque annuel de récidive d'une tumeur dans leur utilisation était de 25% contre 40% chez les patients ayant un gène de moelle osseuse allogénique transplantés.

Le mécanisme d'action des cellules souches du sang de cordon cryoconservés doit être considéré comme le résultat d'une stimulation humorale des bénéficiaires de l'hématopoïèse causés par la capacité unique des cellules néonatales à autocrine production de facteurs de croissance hématopoïétique, ainsi qu'une conséquence de la prise de greffe temporaire des cellules du donneur (comme une confirmation - une augmentation significative de la teneur du receveur de l'hémoglobine foetale dans le sang périphérique 7-15 e jour après la transfusion par rapport à la valeur initiale). Absence chez les receveurs de réactions post-transfusionnelles sang de cordon ombilical - du fait de sa relative tolérance des cellules immunitaires, ainsi que le critère de confiance de l'utilité du matériel biologique cryoconservé.

Les cellules progénitrices de lymphocytes T du sang de cordon tueur capable d'être activée sous l'influence de la stimulation de cytokines exogènes qui est utilisé pour développer de nouveaux ex vivo et dans des procédés in vivo d'induction de cellules lymphoïdes cytotoxiques anti-tumoraux pour une immunothérapie subséquente de transplantation. En outre, le « immaturité » du génome du sang ombilical cellules immunitaires permet leur utilisation pour améliorer l'activité anti-tumorale par modélisation moléculaire.

Aujourd'hui, le sang de cordon a trouvé une large application principalement en hématologie pédiatrique. Chez les enfants atteints de leucémie aiguë allogreffe de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon par rapport à allogreffes de moelle osseuse, réduit de manière significative l'incidence de la réaction « du greffon contre l'hôte ». Cependant, il est noté sur une longue période de neutropénie et thrombocytopénie, et malheureusement, un niveau plus élevé de la mortalité post-transplantation de 100 jours. Une plus longue période de récupération dans les granulocytes de sang périphérique et des plaquettes pourrait être due à une différenciation insuffisante des sous-populations différentes de cellules positives CD34 du sang du cordon ombilical, comme en témoigne le faible niveau d'absorption de la rhodamine radioactive et une faible expression des antigènes CD38 sur leur surface.

En même temps, la transplantation de cellules souches hématopoïétiques du sang ombilical des patients adultes, réalisée en raison du manque à la fois un donneur de moelle osseuse sans rapport compatible, ainsi que les possibilités de mobiliser autologue HSC a montré la survie élevée sans rechute annuel chez les patients âgés de moins de 30 ans (73%) . Expansion tranche d'âge des bénéficiaires (18-46 ans) a diminué la survie à 53%.

L'analyse quantitative des cellules avec le phénotype CD34 + de la moelle osseuse et le sang de cordon a montré plus élevé (3,5 fois) leur contenu dans la moelle osseuse, mais le sang du cordon ombilical a montré une prédominance significative des cellules avec le profil phénotypique de cellules CD34 + HLA-DR .Izvestno, marqueurs chtokletkikrovisimmunologicheskimi CD34 + HLA-DR prolifèrent plus actif que les cellules avec immunophénotypage CD34 + HLA-DR +, comme l'a confirmé dans les études expérimentales de la croissance de la culture à long terme des cellules hématopoïétiques in vitro. Progéniteurs de cellules primitives avec le phénotype CD34 + CD38 contenu dans le sang de cordon et de la moelle osseuse, mais ombilicaux cellules de sang de cordon avec le marqueur fixé CD34 + CD38 ont une activité clonogénique plus élevée que les cellules hématopoïétiques du même phénotype, isolées à partir de moelle adulte donneur de moelle. En outre, les ombilicaux cellules de sang de cordon avec CD34 + CD38 immunophénotypage vont proliférer en réponse à une stimulation avec des cytokines (IL-3, IL-6, G-CSF) et de reproduire 7 fois plus de colonies dans les cultures à long terme que les cellules de moelle osseuse.

Des banques de cellules souches du sang ombilical

Pour le développement d'un nouveau champ de médecine pratique - la transplantation de cellules souches du sang de cordon, ainsi que la transplantation de cellules souches hématopoïétiques de la moelle osseuse, il est nécessaire de disposer d'un réseau ramifié de banques de sang déjà établies aux États-Unis et en Europe. Les réseaux intra-étatiques des banques de sang de cordon sont unis par l'Association des banques Netcord. La possibilité d'établir une association internationale des banques de sang de cordon est déterminé par le fait que pour effectuer des transplantations non liées ont besoin d'un grand nombre d'échantillons de sang de cordon ombilical tapé, ce qui permet de choisir le donneur HLA identique. Seule la mise en place d'un système de banques avec le stockage d'échantillons sanguins de différents types de HLA peut réellement résoudre le problème de trouver le donneur nécessaire. L'organisation d'un tel système de banques de sang de cordon nécessite le développement préalable de normes éthiques et juridiques, qui sont actuellement discutées au niveau international.

Pour créer des banques de sang de cordon en Ukraine, il est nécessaire d'élaborer un certain nombre de dispositions et de documents.

Tout d'abord, il s'agit de standardiser les méthodes d'échantillonnage, de fractionnement et de congélation du sang du cordon ombilical. Il est nécessaire de réglementer les règles pour l'échantillonnage du sang de cordon dans les maternités conformément aux exigences de l'éthique médicale, afin de déterminer la quantité minimale de sang de cordon qui assure une transplantation réussie. Il doit être comparé et la standardisation des différents critères d'évaluation de la qualité et le nombre de cellules souches hématopoïétiques, ainsi que des méthodes typage HLA et les méthodes de diagnostic des maladies génétiques et infectieuses qui peuvent être transmises par la perfusion de cellules de sang de cordon ombilical fixé des critères généraux de sélection des donneurs sains. Il est également intéressant de discuter de la création d'installations de stockage séparées pour le sérum, les cellules et l'ADN dérivé du sang de cordon.

Il est absolument nécessaire d'organiser un réseau informatique de données sur le sang de cordon pour la mise en œuvre de la relation avec les registres des donneurs de moelle osseuse. Pour développer davantage la transplantation cellulaire, des protocoles spéciaux pour comparer les résultats de la transplantation de sang de cordon et de moelle osseuse de parents HLA-identiques et de donneurs non apparentés devraient être développés. En traitant des problèmes éthiques et juridiques de l'utilisation clinique des cellules de sang de cordon peut aider à normaliser la documentation, y compris le consentement éclairé des parents, ainsi que l'avis de la mère ou des parents de l'enfant identifié par les maladies génétiques et / ou infectieuses.

La condition déterminante pour le développement de la transplantation de cellules en Ukraine sera l'adoption du Programme national pour le don de cellules souches et le développement de la coopération internationale avec d'autres pays par le biais de l'Association mondiale de la moelle osseuse du donneur (WMDA), le programme de la moelle osseuse du donneur National (NMDP) et d'autres registres.

En généralisant encore courte histoire de la transplantation de cellules souches hématopoïétiques du sang de cordon ombilical, nous notons que la première hypothèse de la possibilité d'une application clinique de sang du cordon ombilical, fait au début des années 70, ont été confirmées dans les 80 ans, les résultats des études expérimentales chez les animaux, et en 1988 année a été effectué la première transplantation de cellules hématopoïétiques du sang de cordon ombilical humain du monde, puis a commencé à développer un réseau mondial de banques de sang de cordon. Après 10 ans, le nombre de patients avec des cellules hématopoïétiques transplantées, ombilical près de sang de cordon à 800. Parmi eux étaient des patients atteints de diverses maladies tumorales (leucémie, lymphome, tumeurs solides) et non-tumeur (immunodéficience congénitale, l'anémie, les maladies associées aux troubles métaboliques) nature.

Dans le sang de cordon ombilical, la teneur en précurseurs cellulaires précoces et engagés est plus élevée que dans le sang périphérique d'un adulte. Par le nombre d'unités formant des colonies de granulocytes-macrophages et leur potentiel de prolifération, le sang du cordon ombilical dépasse de manière significative le sang périphérique des adultes même après l'introduction de facteurs de croissance. Dans les cultures cellulaires à long terme in vitro, il y avait une plus grande activité proliférative et la viabilité des cellules sanguines du cordon ombilical que les cellules de la moelle osseuse. Les moments critiques de la transplantation de cellules souches du sang du cordon ombilical sont nombre potentiel hématopoïétique et les cellules nucléées, la présence d'une infection à cytomégalovirus, donneur HLA compatible et le receveur, le poids corporel et l'âge du patient.

Néanmoins, la transplantation de cellules souches de sang de cordon ombilical devrait être considérée comme une alternative à la greffe de moelle osseuse afin de traiter les maladies sanguines graves, en particulier chez les enfants. Les problèmes cliniques de transplantation de cellules de sang de cordon ombilical résolus peu à peu - il existe déjà des techniques d'échantillonnage très efficace, la séparation et la cryoconservation des cellules de sang de cordon, à condition que les conditions pour la formation de banques de sang de cordon, les méthodes d'essai sont améliorées cellules nucléées. Optimal pour la séparation avec un approvisionnement à grande échelle de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon ombilical lors de la création de banques doit être considéré comme une solution de gélatine à 3% et une solution à 6% d'hydroxyéthylamidon.

Perehrestenko P. Et al (2001) soulignent à juste titre que la transplantation de cellules souches de sang de cordon doit prendre sa place dans les mesures thérapeutiques complexes à surmonter la dépression de l'hématopoïèse de diverses origines, comme GSK sang de cordon diffèrent dans un certain nombre d'avantages importants, parmi lesquels important est la relative facilité de récolte, il n'y a aucun risque pour le donneur, une faible contamination des cellules néonatales avec des virus et le coût relativement faible de la greffe. Certains auteurs suggèrent que la transplantation d'ombilical des cellules de sang de cordon moins fréquemment que les cellules de la moelle osseuse est accompagnée de complications associées à la réaction de « greffon contre l'hôte », ce qui est dû, selon eux, une faible expression dans les cellules de sang de cordon d'antigènes HLA-DR et leur immaturité. Cependant, la principale population de cellules nucléées du sang de cordon ombilical sont des lymphocytes T (cellules de SDZ-positif), dont le contenu est environ 50%, ce qui est inférieur de 20% dans le sang périphérique d'un adulte, mais les différences phénotypiques des sous-populations de cellules T à partir de ceux-ci sources sont négligeables.

Parmi les facteurs qui affectent directement la survie de la transplantation de cellules souches du sang du cordon ombilical, il faut noter l'âge des patients (les meilleurs résultats sont observés chez les sujets âgés de moins de 5 ans), le diagnostic précoce de la maladie et une forme de leucémie (efficacité est significativement plus élevé dans la leucémie aiguë). La dose de cellules sanguines du cordon ombilical nucléées, ainsi que leur compatibilité HLA avec le receveur, sont d'une grande importance. Il n'y a pas d'analyse des accidents de l'efficacité clinique de la transplantation de sang de cordon GSK en oncologie et en hématologie montre les meilleurs résultats de traitement par greffes connexes: la survie sans maladie d'un an dans ce cas atteint 63%, alors que la greffe sans rapport avec - seulement 29%.

Ainsi, la présence d'un grand nombre de cellules souches dans le sang du cordon et de haute cellules souches hématopoïétiques néonatales capacité de repopulyatsionnaya les rendent aptes à la transplantation allogénique chez les patients atteints de tumeurs malignes hématologiques. Toutefois, notez que la récapitulation de l'hématopoïèse après transplantation de cellules souches hématopoïétiques de sang de cordon « est étiré dans le temps »: le contenu restauration des neutrophiles du sang périphérique se produit généralement vers la fin de la semaine 6, et le phénomène de thrombocytopénie disparaissent, généralement au bout de 6 mois. En outre, les cellules sanguines immatures formant de sang de cordon ombilical ne comprennent pas de conflit immunologique: « greffon contre l'hôte » cours de réaction sévère aiguë et chronique observé respectivement en 23 et 25% des destinataires. Des rechutes de leucémie aiguë à la fin de la première année après la transplantation de cellules du sang de cordon ombilical sont notées dans 26% des cas.

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