Caryotypage

Pour l'étude des chromosomes, des hémocultures à court terme sont souvent utilisées, ainsi que des cellules de moelle osseuse et des cultures de fibroblastes. Le sang délivré au laboratoire avec un anticoagulant est soumis à une centrifugation pour la précipitation des globules rouges, et les leucocytes sont incubés dans le milieu de culture pendant 2 à 3 jours. La phytohémagglutinine est ajoutée à l'échantillon de sang, car elle accélère l'agglutination des érythrocytes et stimule la division des lymphocytes. La phase la plus appropriée pour l'étude des chromosomes est la métaphase de la mitose, de sorte que la colchicine est utilisée pour arrêter la division des lymphocytes à ce stade. L'ajout de ce médicament à la culture conduit à une augmentation de la proportion de cellules en métaphase, c'est-à-dire à ce stade du cycle cellulaire, lorsque les chromosomes sont mieux vus. Chaque chromosome se réplique (produit sa propre copie) et après une coloration appropriée est visible sous la forme de deux chromatides attachées au centromère ou à la constriction centrale. Les cellules sont ensuite traitées avec une solution de chlorure de sodium hypotonique, fixées et colorées.

Pour la coloration des chromosomes, le colorant Romanovsky-Giemsa, 2% d'acétaminomine ou 2% d'acétazarine sont plus souvent utilisés. Ils colorent les chromosomes entièrement, uniformément (la méthode de routine) et peuvent être utilisés pour identifier les anomalies numériques des chromosomes humains.

Pour obtenir une image détaillée de la structure des chromosomes, l'identification (identification) des chromosomes individuels ou de leurs segments, différentes méthodes de coloration différentielle sont utilisées. Les méthodes les plus couramment utilisées sont Giemsa, ainsi que G- et Q-flexion. Un examen microscopique du médicament sur toute la longueur du chromosome révèle une série de bandes colorées (hétérochromatine) et non peintes (euchromatine). Le caractère de la striation transversale obtenue dans ce cas permet d'identifier chaque chromosome dans l'ensemble, puisque l'alternance des raies et leurs tailles sont strictement individuelles et constantes pour chaque paire.

Les plaques de métaphase de cellules individuelles sont photographiées. Les chromosomes individuels sont découpés sur les photographies et collés sur la feuille de papier dans l'ordre; une telle image des chromosomes s'appelle un caryotype.

L'utilisation de coloration supplémentaire, ainsi que de nouvelles méthodes pour obtenir des préparations de chromosomes, qui permettent d'étirer les chromosomes en longueur, augmentent de manière significative la précision des diagnostics cytogénétiques.

Une nomenclature spéciale a été développée pour décrire le caryotype humain. Le caryotype normal d'un homme et d'une femme est désigné par 46, XY et 46, XX, respectivement. Dans le syndrome de Down, caractérisé par la présence d'un chromosome 21 supplémentaire (trisomie 21), le caryotype de la femme est décrit comme 47, XX 21+, et les hommes - 47, XY, 21+. En présence d'une anomalie structurale du chromosome, il est nécessaire d'indiquer un bras long ou court altéré: la lettre p désigne un bras court, q un bras long et t une translocation. Ainsi, lorsque le bras court du chromosome 5 (le syndrome du "chat-cri") est supprimé, le caryotype féminin est décrit comme 46, XX, 5p-. La mère d'un enfant avec translocation syndrome de Down - un transporteur d'une translocation équilibrée de 14/21 a un caryotype de 45, XX, t (14q; 21q). Le chromosome de translocation est formé lorsque les bras longs des chromosomes 14 et 21 fusionnent, les épaules courtes sont perdues.

Chaque épaule est divisée en districts, et à leur tour - en segments, et ceux-ci et d'autres sont désignés par des chiffres arabes. Le centromère du chromosome est le point de départ pour le comptage des régions et des segments.

Ainsi, quatre marqueurs sont utilisés pour la topographie des chromosomes: nombre de chromosomes, symbole de l'épaule, numéro de district et numéro de segment dans la région donnée. Par exemple, 6p21.3 enregistrement signifie que nous parlons de la 6e paire de chromosomes, son bras court, zone 21, le segment 3. Il y a des personnages optionnels, en pter particulier - la fin du bras court, qter - la fin du bras long.

La méthode de recherche cytogénétique permet de détecter des délétions et autres changements dans les chromosomes seulement dans la taille d'environ 1 million de bases (nucléotides).

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