Réaction en chaîne par polymérase (PCR) dans le diagnostic de maladies infectieuses
Dernière revue: 23.04.2024
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PCR - l'une des méthodes pour le diagnostic d'ADN permettant d'augmenter le nombre de copies d'une partie détectable du génome (ADN) de bactéries ou de virus est un million de fois en utilisant une enzyme ADN polymerase. Un test de ce segment d'acide nucléique génomique spécifique multipliée plusieurs fois (amplifié), qui permet son identification. Tout d'abord, une molécule d'ADN de bactéries ou de virus par chauffage divisé en deux chaînes, puis en présence des amorces d'ADN synthétisés (séquence de nucleotides spécifiques de l'ADN génomique défini) est de les lier avec des étirements complémentaires de l'ADN, synthétisé le second brin de l'acide nucléique après chaque amorce en présence d'une ADN polymérase thermostable . Il se trouve les deux molécules d'ADN. Le processus est répété plusieurs fois. Pour le diagnostic, une seule molécule d'ADN, à savoir une bactérie ou particule virale. La réaction d'une étape supplémentaire - la synthèse d'ADN sur la molécule d'ARN en utilisant l'enzyme transcriptase inverse - a permis de tester des virus à ARN tels que le virus du VHC. PCR - processus en trois étapes, des cycles répétés de dénaturation, d'annelage d'amorces, la synthèse d'ADN (de polymérisation). La quantité d'ADN synthétisé a été identifié par ELISA ou par électrophorèse.
La PCR peut être utilisée dans différents matériaux biologiques - le sérum ou le plasma sanguin, le grattage de l'urètre, une biopsie, du liquide pleural, du liquide céphalorachidien, etc. La première PCR a été utilisée pour le diagnostic de maladies infectieuses telles que l'hépatite virale B, l'hépatite C virale, l'hépatite virale D, une infection à CMV, une infection sexuellement transmissible infectieuse (gonorrhée, diynaya des ordures, des mycoplasmes, une infection à Ureaplasma), la tuberculose, le VIH -infektsiya etc.
L'avantage de la PCR dans le diagnostic des maladies infectieuses par rapport aux autres méthodes de recherche est le suivant:
- l'agent causal de l'infection peut être trouvé dans n'importe quel environnement biologique du corps, y compris le matériel obtenu par biopsie;
- Il est possible de diagnostiquer les maladies infectieuses dès les premiers stades de la maladie.
- Une évaluation quantitative des résultats de la recherche est possible (combien de virus ou de bactéries sont contenus dans le matériel étudié);
- haute sensibilité de la méthode; par exemple, la sensibilité de la PCR pour la détection de l' ADN du virus de l' hépatite B dans le sang est de 0,001 pg / ml (environ 4 x 10 2 copies / ml), alors que la sensibilité d'un procédé d'hybridation d'ADN en utilisant des sondes ramifiés - 2,1 pg / ml (environ 7 × 10 5 copies / ml).
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